产品简介:
Calcein,
AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素(绿色)
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产品关键词:
Calcein, AM 钙黄绿素AM;Calcein
Red 钙黄绿素红;TRITC;活细胞染色探针;Fluorescein diacetate (FDA);CAS NO:148504-34-1;
产品信息
产品名称
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产品编号
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规格
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价格(元)
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促销价(元)
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Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素(绿色,超纯级别)
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MX3011-50UG
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50μg
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280
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210
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Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素(绿色,超纯级别)
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MX3011-250UG
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5×50μg
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1150
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920
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Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素(绿色,超纯级别)
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MX3011-1MG
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1mg
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2530
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2280
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【好消息】:目前最高纯度的钙黄绿素乙酰甲酯(Calcein,
AM,HPLC>97%)限时促销开始啦,本促销最终解释权归上海懋康生物科技有限公司。本品长时间销售供货给国内各大科研机构,以质优价优获得各老师的青睐。50μg单只特惠包装,按照5μM的工作浓度,用于96孔板内活细胞检测(工作体积100μl)可以做100个样本。单个样本检测成本仅2元,非常划算。
【好消息】:我司(懋康生物)推出钙黄绿素系列产品,覆盖几种荧光光谱,满足你对活细胞进行多重标记和功能分析的需求。不用再困惑于GFP或FITC等常用荧光素同钙黄绿素之间的荧光重叠啦。有这么多的选择,不用烦烦烦啦。
产品描述
Calcein, AM,中文名钙黄绿素乙酰甲酯,CAS NO:148504-34-1,一种具细胞膜渗透性的活细胞荧光染料,呈绿色荧光(Ex/Em= 490nm/515nm)。AM基团的存在不仅加强疏水性,使其能轻易穿透活细胞膜。而且封闭结合钙离子的分子部分,本身不发荧光。一旦进入细胞后,被细胞内酯酶水解为钙黄绿素(calcein),能与胞内钙离子结合,产生强烈的绿色荧光。因不具有细胞膜渗透性,从而被保留在胞内。与其它活细胞染料(如BCECF-AM,CFDA)相比,Calcein, AM最适合用于活细胞染色探针,因细胞毒性很低,而且不会抑制任何细胞功能如增殖或淋巴细胞趋化性。另外,使用Calcein, AM活性检测的实验结果十分可信,与标准的51Cr释放法所得结果一致。
由于死细胞缺乏酯酶,Calcein, AM仅对活细胞进行标记,这一特征使其非常适合用来检测细胞活力和细胞的短期示踪。常常与碘化丙啶PI联合使用,因其仅能穿过死细胞膜的无序区域到达细胞核,嵌入细胞的DNA双螺旋区域,并产生红色荧光(Ex/Em=
535nm/617nm),仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发,仅可观察到死细胞。结合这些特点,Calcein, AM和PI经常被结合用作活细胞和死细胞的双重染色。
本品以粉末形式提供,超纯级别(≥95%),可与碘化丙啶PI(货号:MX4205-10MG)联合使用,进行活细胞和死细胞的双重染色。
产品特性
1) CAS NO:148504-34-1
2)同义名:钙黄绿素乙酰甲酯;3'-O-乙酰胺-2',7'-二(羧乙基)-4或5-羧基荧光素,二乙酰甲酯;
3)分子式:C46H46N2O23
4)分子量:994.86
5)纯度:≥95%(HPLC)
6)外观:白色或浅黄色结晶粉末
7)溶解性:溶于DMSO(1~5mM)
8)化学结构式:
保存与运输方法
保存:-20℃干燥保存,避免强光直射,有效期一年。
运输:冰袋运输。
注意事项
1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2)乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量,开封前请将其短暂离心,以保证粉末落入管底。
3) Calcein-AM对湿度非常敏感,粉末保存一定要保持干燥。Calcein-AM储存液需要分装避光冻存,且必须紧紧密封盖子,干燥保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
A, 储存液制备
储存液配制范围可为1~5 mM,具体根据工作浓度来决定,建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM,那么可配制5mM的储存液,即往50μg Calcein, AM(Mw:994.86)内加入10μl 细胞培养级别的DMSO(货号:MS4601-100mL)即可。
B, 20% Pluronic
F-127制备【可选】
称取100mg Pluronic F-127粉末(货号:MS4301-100MG)中加入500μl
DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不用冷藏。如有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。
C, 染色步骤
大多数实验体系中Calcein, AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同,初次实验建议做梯度实验,以确定Calcein, AM的最佳工作浓度,以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。
1) 取一管适量分装的储存液(1000×)置于室温,至少回温20min,低速离心后,用合适的缓冲液如PBS,HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。
【注意】:有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic
F127到Calcein AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前,取一管Calcein AM储存液内加入等体积的20%
Pluronic F127,使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic
F127的Calcein AM溶液不可长期保存,需现配现用。
2) 对于贴壁细胞,先用胰酶-EDTA消化细胞,离心收集细胞(1000 rpm,3min)。对于悬浮细胞,直接离心收集细胞。
3) 去上清,用PBS(或者其他缓冲液)清洗细胞2~3次,以充分去除残留的酯酶活性。
4) 用1/10细胞培养基体积的Calcein,
AM染色工作液重悬细胞,37℃孵育15~30min。
【注意】:若细胞自身含有机阴离子转运体,需加入丙磺舒(1-2.5mM)或者苯磺唑酮(0.1-0.25mM)到孵育体系内以降低Calcein泄露到胞外。
5) 用PBS(或者其他缓冲液)洗涤细胞两次去除多余染料。
【注意】:如有必要,使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗。用含合适滤光片(Ex/Em= 490nm/515nm)的荧光显微镜进行检测。
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— —Written/Edited by V.
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