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Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml)
目录号 MS0009-125MG 售价 420.00元
规格 125mg 运输温度 冰袋运输
其他名称 博莱霉素(博来霉素),腐草霉素D1 保存温度 -20℃避光保存
CAS号 11006-33-0 有效期 至少1年
应用 Sh ble基因的筛选抗生素 订购数量
产品简介:

Zeocin (100mg/ml)  博莱霉素(100 mg/ml)



【温馨提示】:如果你对市场上常见中文名都叫【博莱霉素】,但英文名又不同的一些产品感到有所迷惑,可参考我司【懋康生物】整理的Bleomycins (BLMs) 博莱霉素家族常用抗生素成员的应用选择,也许有所收获。


博莱霉素家族常见产品:

筛选抗生素:Zeocin【冻干粉】  Zeocin【100mg/ml】     Phleomycin 腐草霉素

细胞功能研究:Bleomycin Sulfate 硫酸博莱霉素     Bleomycin A5 Hydrochloride 盐酸博莱霉素A5


产品标签

Zeocin 博莱霉素(博来霉素);Phleomycin 腐草霉素;Sh ble基因;Streptomyces verticillus 轮枝链霉菌;Hygromycin B 潮霉素B;G418遗传霉素;CAS NO.:11006-33-0

 

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)    

Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml)   

MS0009-125MG      

125mg            

420

Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml)

MS0009-500MG

4×125mg

1480

Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml)

MS0009-1000MG

8×125mg

2850

【提示1】:另现货供应Invitrogen原装进口的Zeocin(博来霉素);

【提示2】:对Zeocin不敏感的细胞,如丝状真菌和一些酵母菌,建议使用腐草霉素(货号:MS0008-1ML),抗性基因同样为Sh ble。

【提示3】:特价供应含Zeo+基因序列的质粒— — pcDNA 3.1/Zeo(+)(Invitrogen of Thermo),序列图谱点击下载文档。


产品描述

Zeocin™是博来霉素/腐草霉素(bleomycin/phleomycin)抗生素家族的成员之一,从轮枝链霉菌Streptomyces verticillus中分离得到。作用谱广泛,对细菌、真菌(包括酵母菌)、植物和哺乳动物细胞具很强的毒性。


Zeocin™是腐草霉素D1的商业名称,一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。铜离子的存在使得溶液为蓝色,此铜螯合的形式为无活性。当抗生素进入细胞后,二价铜离子(Cu2+)被还原为一价铜离子(Cu+),并被细胞内的巯基化合物去除。铜离子被去除后,Zeocin被活化,嵌入DNA使其断裂,最终导致细胞死亡。来自Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因赋予Zeocin抗性,该基因编码一种13,665Da大小的蛋白,以化学计量方式结合Zeocin,抑制其DNA双链切割活性。因此,能表达此蛋白的真核和原核宿主细胞被赋予Zeocin抗性。


本品为溶于去离子水的无菌溶液,浓度为100mg/ml,细胞培养级别。


产品特性

1)CAS NO.:11006-33-0

2)化学式:C55H83N19O21S2Cu

3)分子量:1137.41 g/mol

4)外观:蓝色溶液(100mg/ml in deionized,autoclaved water)


保存与运输方法

保存:-20℃避光保存,至少1年有效,避免反复冻融。

运输:冰袋运输。


建议工作浓度

1)大肠杆菌筛选:25-50μg/mL(低盐LB培养基,NaCl浓度不能超过5g/L)

2)酵母菌筛选:50-300μg/mL(YPD或基本培养基)

3)哺乳动物细胞筛选:50-1000μg/mL(合适培养基,根据细胞系而不同)


注意事项

1)Zeocin™对光敏感,需将抗生素,或含该抗生素的平板或培养基置于黑暗处。

2)降低细菌培养基的盐浓度,调整pH到7.5使其保持活性,因高离子强度和酸或碱性都会抑制Zeocin™活性。

3)储存Zeocin™在-30°C~-10°C,使用前需冰上融化。

4)Zeocin™有毒,操作时需注意防护,切勿与身体或皮肤直接接触。

5)Zeocin™是Invivogen公司的商标产品。

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


操作步骤(以哺乳动物细胞为例)

【注1】:Zeocin™的杀灭机制不同于新生霉素(neomycin)和潮霉素B(hygromycin B),细胞不会聚集成团和从培养板表面脱落。一旦接触到Zeocin™,敏感细胞会出现如下的形态变化:1)细胞体积明显增加(类似于巨细胞病毒感染容纳性细胞引起的肿大效应);2)异常的细胞形状包括细胞长臂(long appendages)出现;3)胞浆内出现大型空泡(源于内质网、高尔基体或支撑蛋白的破裂);4)质膜和核膜破裂,导致膜上出现许多孔。这些敏感细胞最终会完全破损,仅仅以细胞碎片的形式存在。

【注2】:Zeocin™抗性细胞按正常周期分化产生不同于敏感细胞的克隆。抗性细胞在形态上,与未接触Zeocin™的正常细胞没有任何差异。

【注3】:Zeocin™用于哺乳动物细胞筛选常用浓度为50-1000µg/ml(平均常用浓度为250-400μg/mL),影响筛选浓度的主要因素包括离子强度,细胞类型,细胞密度以及生长速率。以下步骤仅作参考,请根据自身实验体系做适当调整。


一、细胞对Zeocin™敏感性的确定(杀灭曲线建立)

1)重新铺板或者将满盘细胞重新分盘,使得细胞密度约25%,按照8个平板/组准备,培养24h,去除旧培养基。

2)加入含不同浓度Zeocin™的筛选培养基,Zeocin™浓度可设置为0, 50, 100, 200, 400, 600, 800和1000 μg/ml,每个浓度做3个平行;也可根据自身实验体系,设置不同的浓度梯度。

3)每3-4天更换新鲜的筛选培养基,并观察存活细胞的比例。选择在合适时间(1-2周内)杀死大多数细胞的浓度为最佳工作浓度【注】:若是难以在显微观察下区分活细胞,建议使用台盼蓝染色来计算存活细胞的数量,以确定Zeocin™的最适浓度。


二、筛选稳定转染细胞系

1)转染细胞,用100mm培养皿进行培养。以未转染的细胞作为阴性对照。

2)转染后,用预热的1X PBS洗涤一次,加入新鲜培养基。

3)转染48-72h后,用含有最佳浓度Zeocin™(由灭杀曲线确定)的新鲜培养基筛选细胞。为了更好的鉴定和筛选细胞集落,建议将细胞按比例稀释成一系列浓度。

【注】:若待筛选细胞对Zeocin的抗性明显强于大部分细胞,按照以下方法克服此类耐性:用含Zeocin™培养基进行细胞分盘,置于37°C孵育2-3h,使得细胞贴壁。然后将细胞置于4°C,2h。记得使用Hepes作为培养基的缓冲体系。重新将细胞置于37°C孵育。4°C孵育细胞的目的是短时间内终止细胞分化,使得Zeocin™能发挥作用,杀死细胞。

4)每3-4天更换新鲜的选择培养基,直到出现细胞集落。

5)挑选并转移克隆到96或48孔板中。在进行更大孔径培养板或培养皿上扩大培养之前,确保培养细胞密度近100%。


三、稳定转染细胞系的维持培养

可采取以下方式维持培养稳定转染细胞:

1)使用含相同剂量Zeocin™的筛选培养基来维持培养;

2)降低Zeocin™剂量为原来的一半进行维持培养;

3)使用正好能预防敏感细胞生长但不足以致死的Zeocin剂量来维持培养【根据杀灭曲线来判断】;


 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。


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