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Invitrogen Zeocin 博莱霉素(Sh ble基因筛选抗生素)
时间:2016-09-07     作者:懋康生物     文章来源:懋康原创    

 



【温馨提示】:如果你对市场上常见中文名都叫【博莱霉素】,但英文名又不同的一些产品感到有所迷惑,可参考我司【懋康生物】整理的Bleomycins (BLMs) 博莱霉素家族常用抗生素成员的应用选择,也许有所收获。


博莱霉素家族常见产品:

筛选抗生素:Zeocin【冻干粉】  Zeocin【100mg/ml】     Phleomycin 腐草霉素

细胞功能研究:Bleomycin Sulfate 硫酸博莱霉素     Bleomycin A5 Hydrochloride 盐酸博莱霉素A5




产品关键词:

Zeocin 博莱霉素(博来霉素);Phleomycin 腐草霉素;Sh ble基因;Streptomyces verticillus 轮枝链霉菌;Hygromycin B 潮霉素B;G418遗传霉素;CAS NO.:11006-33-0


基本描述:

Zeocin™是博来霉素/腐草霉素(bleomycin/phleomycin)抗生素家族的成员之一,从轮枝链霉菌Streptomyces verticillus中分离得到,对细菌、真菌(包括酵母菌)、植物和哺乳动物细胞具很强的毒性。来自Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因赋予Zeocin抗性。


Zeocin™是腐草霉素D1的商业名称,一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。铜离子的存在使得溶液为蓝色,此铜螯合的形式为无活性。一旦进入细胞后,二价铜离子(Cu2+)被还原为一价铜离子(Cu+),并被细胞内的巯基化合物去除。铜离子被去除后,Zeocin™被活化,嵌入DNA使其断裂,最终导致细胞死亡。


抗性基因:

Zeocin™抗性由编码一种13,665Da大小蛋白的Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene)赋予,该蛋白化学计量方式结合Zeocin™,抑制其DNA双链切割活性。因此,能表达此蛋白的真核和原核宿主细胞被赋予Zeocin™抗性。


基本特性:

1)CAS NO.:11006-33-0

2)化学式:C55H83N19O21S2Cu

3)分子量:1137.41 g/mol

4)外观:蓝色溶液(100mg/ml in deionized,autoclaved water)

5)运输:冰袋运输

6)保存:-30°C~-10°C,至少1年有效

7)大肠杆菌筛选:25-50μg/mL(低盐LB培养基,NaCl浓度不能超过5g/L)

8)酵母菌筛选:50-300μg/mL(YPD或基本培养基)

9)哺乳动物细胞筛选:50-1000μg/mL(合适培养基,根据细胞系而不同)


注意事项:

1)Zeocin™对光敏感,需将抗生素,或含该抗生素的平板或培养基置于黑暗处。

2)降低细菌培养基的盐浓度,调整pH到7.5使其保持活性,因高离子强度和酸或碱性都会抑制Zeocin™活性;

3)储存Zeocin™在-30°C~-10°C,使用前需冰上融化。

4)Zeocin™有毒,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法(应用举例):

1)大肠杆菌(E. Coli.)

宿主:不能包含Tn5转座子(比如:Top10,DH5,DH10)

培养基:使用低盐LB(10g Trypton,5g NaCl,5g Yeast extract),pH 7.5,防止Zeocin™失活

选择浓度:25-50μg/mL用于大肠杆菌筛选


2)酵母菌(Yeast)

宿主:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),毕赤酵母(Pichia pastoris)

培养基:含1M山梨醇的YPD(电转化细胞);YPD或基本培养基(化学转化细胞);测试培养基调pH到6.5-8.0,选择pH值允许使用最低浓度Zeocin™。

转化方法:电转法,使用锂离子步骤或使用EasyComp试剂盒。不能使用原生质体用于酵母转化,因Zeocin™会引起完整细胞死亡。

选择浓度:50-300μg/mL,取决于酵母菌类型、培养基pH和离子强度。建立杀灭曲线确定能杀死未转化宿主细胞的最低Zeocin™浓度。


3)哺乳动物细胞(Mammalian cells)

50-1000μg/mL用于筛选稳定转染细胞系(平均常用浓度为250-400μg/mL)。取决于细胞系,需要2-6周用Zeocin™筛选得到稳转集落(foci)。进行稳转株正式筛选前,需确定能够杀死所有未转染宿主细胞的最低Zeocin™浓度。

1) 确定细胞对Zeocin™的敏感性

2)筛选稳定转染细胞系

筛选小技巧:若是细胞对Zeocin™耐性更强,可用含Zeocin™培养基进行细胞分盘,并置于37°C孵育2-3h,使得细胞贴壁。然后将细胞置于4°C,2h。记得使用Hepes作为培养基的缓冲体系。重新将细胞置于37°C孵育。4°C孵育细胞的目的是短时间内终止细胞分化,使得Zeocin™能发挥作用,杀死细胞。


订购信息:原装进口,现货供应欢迎来电订购,电话:021-54736159,手机:18121428569,杨先生。

产地           

产品名称                                       

产品货号           

规格                      

单位         

 目录价(元)

促销价(元

Invitrogen

Zeocin 博莱霉素(100mg/ml)

R250-01

125mg(1.25ml)

680

550

Invitrogen

Zeocin 博莱霉素(100mg/ml)

R250-01

1g(8 x 1.25ml)

4184

3250

【注意1】:对Zeocin不敏感的细胞,如丝状真菌和一些酵母菌,建议使用腐草霉素(货号:MS0008-1ML),其抗性同样源于Sh ble基因。 【注意2】:特价供应含Zeo+基因序列的质粒— — pcDNA 3.1/Zeo(+)(Invitrogen of Thermo),序列图谱点击下载文档。


应用图片【Zeocin™筛选下的HEK293细胞】:

HEK293细胞用含10% FBS,1mM L-谷氨酰胺和400μg/mL双抗的培养基,分别在添加和未添加400μg/mLZeocin™的培养基选择培养。

 图1,未经Zeocin™筛选的HEK293细胞。


 图2,经Zeocin™筛选3天后的HEK293细胞。随着质膜破裂,往细胞外延伸长出长臂(long appendages)。(见实心箭头标注)


 图3,经Zeocin™筛选3天后的HEK293细胞。细胞开始破裂,培养基内发现细胞颗粒。(见空心箭头标注)


— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。


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