GUS Histochemical Stain Kit GUS染色试剂盒（组织化学法）

— — 转基因植物GUS表达活性定性研究

关键词：β-glucuronidase (GUS) β-葡（萄）糖苷酸酶；X-Gluc；GUS活性检测；Histochemical 组织化学定位法；MUG；农杆菌介导的转基因植物研究；

基本描述：

GUS，英文名β-glucuronidase，中文名β-葡（萄）糖苷酸酶，一种功能非常全面的报告基因检测系统，广泛用于植物分子生物学和微生物学研究。GUS基因融合系统，根据底物的类型，对细胞/组织或蛋白提取液的GUS酶活性进行定性或定量分析。组织化学方法（定性研究）用于GUS融合蛋白表达的亚细胞定位，多以X-Gluc为底物，因其能被水解生成一无色的葡萄糖醛酸和一肉眼可见的氯-溴靛蓝（chloro-bromoindigo）深蓝色沉淀。荧光分析法（定量研究）则用于GUS融合蛋白表达水平的研究，常以MUG为底物，因其能被水解生成一无色的葡萄糖醛酸和一荧光产物4-MU（4-甲基伞型酮），蓝色荧光（Ex= 365nm，Em= 445nm）。

由于绝大多数植物细胞内不存在内源性的GUS活性，因此，GUS广泛用作转基因植物的报告基因，特别是外源基因瞬时表达的转化实验。

产品特点：

本试剂盒以X-Gluc为显色底物，用于GUS融合蛋白的组织化学染色（定性研究）。另，该试剂盒含染色所需的所有试剂，只需将X-Gluc溶液和GUS染色缓冲液按比例混合即可制备成GUS染色工作液。该试剂盒可制备50ml染色工作液。具有操作简单、快速，稳定，且低背景的优点。

产品组分：

产品使用：

一、X-Gluc（50×）溶液的配制

1）于实验前提前将X-Gluc Substrate（组分A）、GUS Stain Buffer（组分C）置于室温回温至少20min；

2）低速离心组分A，X-Gluc Solvent（组分B）。然后将所有的组分B加入组分A，低速漩涡至粉末完全溶解，即配制X-Gluc（50×）溶液，根据单次用量，-20℃避光保存。

【注意】：正常X-Gluc（50×）溶液呈无色，若溶液变为红色或棕色，说明其失效。

二、GUS染色工作液的配制

按照以下比例，混合制备GUS染色工作液。建议现配现用。

三、GUS染色步骤

1）取材：将根茎、叶片、花瓣等组织剪成小片，放到1.5ml离心管；

【注意】：染色用植物材料的制备方法根据特定组织和器官类型而有差异。对于拟南芥的根/花/叶片，以及烟草幼苗的根，可以不做任何预处理直接进行染色；但是，对于烟草和马铃薯的茎和叶片需要先剪切成薄片（~1-3mm）再进行染色。而，更大的组织样品，需用真空渗透法来促进染色工作液渗入细胞。

2）染色：加入适量体积现配好的染色工作液，以完全覆盖材料为准。铝箔纸包好，室温孵育3h-过夜。同时设置阴性和阳性对照实验；

3）脱色：将染色好的材料转入70%酒精中脱色2-3次，直至阴性对照材料变为白色。GUS染色阳性的蓝色斑点非常稳定，不会被酒精脱色。

4）观察：大部分GUS染色阳性的蓝色斑点肉眼能观察到，然而，有些材料可能蓝色斑点很细微，需要显微镜下才能观察到。【注意】：白色背景上的蓝色斑点即为GUS表达位点。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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