CellROX Green Reagent, for oxidative stress detection

氧化应激检测用探针（绿色）

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见我司（懋康生物）整理的活性氧ROS荧光探针专题。

见我司（懋康生物）整理的CellROX Reagent, for oxidative stress detection 氧化应激检测探针产品专题。

搜索关键词：

Reactive oxygen species (ROS) 活性氧；DCFH-DA；HPF 羟苯基荧光素；Mitosox 线粒体超氧化物探针；Dihydroethidium (DHE)  二氢乙锭；ROSGreenTMH2O2Probe；Life (Molecular Probe) ；

订购信息：

产品描述：

CellROX Green Reagent是一种检测活细胞氧化应激的新型荧光探针。此细胞膜渗透性的染料在还原态时无荧光或呈微弱荧光，一旦被活性氧物质（ROS）氧化并结合到DNA后发明亮稳定的绿色荧光，最大吸收/发射波长约~485/520 nm（见图I. CellROX Green氧化后的荧光光谱图）。其荧光信号主要定位在细胞核和线粒体。此染料能够被甲醛固定且能承受表面活性剂处理，因此，特别适合与其他兼容性染料和抗体进行多重标记检测。CellROX Green Reagent与各种检测平台兼容，比如传统荧光显微镜、高内涵筛选仪器（HCS）、流式细胞仪、荧光酶标仪或高通量筛选（HTS）。还与各种台式仪器兼容，比如FLoid™，Tali™，和Attune™仪器。

图1. CellROX Green氧化后的荧光光谱图

本品以稳定、即用型的DMSO溶液形式提供，浓度为2.5mM，操作简单，勿需清洗，与荧光显微镜的标准工作流程兼容。每管染料（50µl）足够做1个96孔板或20张爬片。适用于任何细胞类型的氧化应激检测。

保存与运输方法

保存：≤-20ºC避光保存，保持干燥，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   本品对光和空气敏感，使用过程中切记不可长时间敞开瓶盖。当瓶子开口后建议丢掉未用完的材料。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.     需要自行准备的材料

1.1    细胞和培养基

1.2    生理盐缓冲液（PBS，pH 7.2-7.6）

1.3    【可选】固定剂（比如，溶于PBS的3.7%甲醛）

1.4    【可选】破膜剂（比如，0.5% Triton X-100）

2.     实验步骤

以下步骤专门为BPAE，HepG2, U-2 OS和RAW巨噬细胞所开发，优化后的染色工作浓度为5µM，但是此实验适用于任何细胞类型。生长培养基、细胞密度、细胞类型变化和其他因素可能会影响标记效率。在初始实验，建议设置浓度梯度，以确定最佳的实验条件和适合研究细胞类型的工作浓度。

CellROX Green Reagent对光和空气敏感，使用过程中切记不可长时间敞开瓶盖。当瓶子开口后建议丢掉未用完的材料。

2.1    用待测化合物或药物处理细胞，孵育一定时间。【注】：待测化合物或药物处理后没有必要去除培养基。

2.2    加CellROX Green Reagent到细胞内使其终浓度为5µM，37℃孵育30min。

2.3    去除培养基，用PBS清洗3次。

2.4    【可选】可用3.7%甲醛固定细胞15min。需在CellROX Green Reagent染色24h内进行荧光信号检测。

2.5    【可选】此时可用NucBlue活细胞染料（一种细胞核复染剂）或其他复染剂如Hoechst 33342（CAT#：MX4204-10ML）对细胞染色。

2.6    【可选】如果与其他试剂的多重标记实验要求进行细胞透化，可用0.5% Triton X-100透化处理10min。

应用示例

图II. CellROX Green Reagent测定牛肺动脉内皮细胞（BPAE）的氧化应激水平。在MatTek激光共聚焦专用玻底培养皿内铺BPAE细胞。之后用含维生素K3（100µM）或不含维生素K3的培养基37℃处理1h。向某些对照和维生素K3处理孔内加入N-乙酰半胱氨酸（NAC，50µM）。之后细胞用CellROX Green Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，前者加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Zeiss Axiovert倒置显微镜下检测（40X物镜）。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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