目录号 | MF2522-1000MG | 售价 | 556.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 1g | 运输温度 | 冰袋运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | 5-fluoro-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid; 5-Fluorouracil-4-carboxylic acid; | 保存温度 | -20℃干燥保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | 220141-70-8 | 有效期 | 2年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 酵母反选择试剂(反筛选药物) | 订购数量 |
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产品简介: 5-Fluoroorotic Acid (5-FOA) 5-氟乳清酸
搜索关键词: 5-FOA 5-氟乳清酸;URA3基因;Orotine-5'-monophosphate (OMP) decarboxylase;Counter-selection agent反选剂;CAS:703-95-7;
产品描述: 5-氟乳清酸(5-Fluoroorotic Acid,5-FOA)用于酵母反选是一种常用的分子遗传筛选方法。酵母菌质粒清除、质粒穿梭、等位置换和双杂交筛选都会用到5-FOA。5-FOA自身对酵母细胞无毒,但功能型URA3基因能编码表达乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶(OMP脱羧酶),将其转化为有毒形式(如5-氟尿嘧啶),从而使得酵母细胞无法生长。因此,在添加尿嘧啶的5-FOA培养基中,携带URA3突变基因的酵母菌能正常生长。5-FOA主要用于酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae(URA3)的鉴定和筛选,虽然曾用于其他菌株,包括粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe(URA4 and URA5),白色念珠菌Candida albicans(URA3)和大肠杆菌E. coli(pyrF)。酵母双杂交系统中5-FOA的使用允许构建激活结构域杂交文库来鉴定蛋白-蛋白相互作用。
产品应用: 1. 检测酵母URA3基因表达; 2. 构建酵母双杂交文库; 3. 其他酵母遗传学领域包括基因替换,可移动遗传因子分析和基因突变鉴定研究。
重要参数 1) CAS NO:703-95-7, 220141-70-8, 207291-81-4 2) 同义名:5-fluoro-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid; 5-Fluorouracil-4-carboxylic acid; 5-Fluoro orotic acid; 2,6-Dihydroxy-5-fluoropyrimidine-4-carboxylic acid; 3) 纯度:≥98% 4)外观:类白色至淡黄色粉末 5)熔点:~258°C(高温非常稳定,如煮沸和高压灭菌) 6)溶解性:溶于DMSO,微溶于水,乙醇,甲醇
使用方法 一、5-FOA培养基配置方法(以粉末形式) 1.1 配制400ml标准的酵母合成培养基,并加入1g 5-FOA(#MF2521)粉末,充分溶解混匀,0.22µm滤膜过滤除菌。【或者可当高压灭菌的标准培养基冷却到55ºC后再加入1g 5-FOA粉末,然后过滤除菌。】 1.2 高压灭菌琼脂粉/水混合液(浓度为20g/600ml),使其冷却到55ºC。 1.3 将温热的5-FOA培养液倒入琼脂粉/水溶液内,搅匀后,倒平板。
二、5-FOA培养基配置方法(以储存液形式) 2.1 取100mg 5-FOA冻干粉,用1ml无水DMSO充分溶解,配制成100mg/ml(100×)的储存液。短期频繁使用,置于4ºC避光保存;长期保存,根据单次用量分装冻存,-20ºC保存6个月有效。 2.2 根据实验室认可的方法,配制标准的酵母合成培养基(含琼脂粉),高压灭菌。放入转子一起灭菌以便后续搅匀组分用。 2.3 冷却到55ºC后加入任何热敏感组分(氨基酸,糖类或者其他成分)。 2.4 每升培养基加10ml100×5-FOA储存液,混匀后,倒平板。
常见问题(FAQs): Q1. 如何保存5-FOA? A1. 5-FOA粉末可置于4°C短期保存,-20°C长期保存。根据产品特性溶解配置储存液,需避光置于4°C短期保存。小量分装后-20°C长期保存,可稳定保存6个月。 Q2. 5-FOA选择性培养基pH是多少? A2.大于pH 4.5条件下5-FOA选择性被破坏,唯一的问题在于质子化形式的FOA会渗透进入细胞。一般情况标准配方配置的平板pH=2.8。在pH=6或6.2时5-FOA完全无活性,pH =5.4时5-FOA活性很好,pH=4或更低时5-FOA活性达到100%。正常情况配置5-FOA培养基不用调pH。 Q3.预制的5-FOA选择性平板能保存多久? A3.绝大多数实验室保存5-FOA预制平板数月(3-6个月)。有的实验室数据显示能放9个月和>12个月(4°C存放),圈上封口膜防止干燥。 Q4. 5-FOA使用浓度? A4. FOA(1mg/ml)在酵母分子遗传学中常用作选择性试剂;在Ura+细胞群体重筛选出Ura-细胞;筛选酿酒酵母菌乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶(OMP脱羧酶)突变株。FOA(0.1mg/ml)用来正筛选尿嘧啶营养缺陷型的硫依赖型嗜热古细菌(Sulfolobus acidocaldarius)。
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