5-Fluoroorotic Acid (5-FOA) 5-氟乳清酸

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5-FOA 5-氟乳清酸；URA3基因；Orotine-5'-monophosphate (OMP) decarboxylase；Counter-selection agent反选剂；CAS：703-95-7；

产品描述：

5-氟乳清酸（5-Fluoroorotic Acid，5-FOA）用于酵母反选是一种常用的分子遗传筛选方法。酵母菌质粒清除、质粒穿梭、等位置换和双杂交筛选都会用到5-FOA。5-FOA自身对酵母细胞无毒，但功能型URA3基因能编码表达乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶（OMP脱羧酶），将其转化为有毒形式（如5-氟尿嘧啶），从而使得酵母细胞无法生长。因此，在添加尿嘧啶的5-FOA培养基中，携带URA3突变基因的酵母菌能正常生长。5-FOA主要用于酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae（URA3）的鉴定和筛选，虽然曾用于其他菌株，包括粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe（URA4 and URA5），白色念珠菌Candida albicans（URA3）和大肠杆菌E. coli（pyrF）。酵母双杂交系统中5-FOA的使用允许构建激活结构域杂交文库来鉴定蛋白-蛋白相互作用。

产品应用：

1. 检测酵母URA3基因表达；

2. 构建酵母双杂交文库；

3. 其他酵母遗传学领域包括基因替换，可移动遗传因子分析和基因突变鉴定研究。

重要参数

1） CAS NO：703-95-7, 220141-70-8, 207291-81-4

2） 同义名：5-fluoro-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid; 5-Fluorouracil-4-carboxylic acid; 5-Fluoro orotic acid; 2,6-Dihydroxy-5-fluoropyrimidine-4-carboxylic acid;

3） 纯度：≥98%

4）外观：类白色至淡黄色粉末

5）熔点：~258°C（高温非常稳定，如煮沸和高压灭菌）

6）溶解性：溶于DMSO，微溶于水，乙醇，甲醇

使用方法

一、5-FOA培养基配置方法（以粉末形式）

1.1 配制400ml标准的酵母合成培养基，并加入1g 5-FOA（#MF2521）粉末，充分溶解混匀，0.22µm滤膜过滤除菌。【或者可当高压灭菌的标准培养基冷却到55ºC后再加入1g 5-FOA粉末，然后过滤除菌。】

1.2 高压灭菌琼脂粉/水混合液（浓度为20g/600ml），使其冷却到55ºC。

1.3 将温热的5-FOA培养液倒入琼脂粉/水溶液内，搅匀后，倒平板。

二、5-FOA培养基配置方法（以储存液形式）

2.1 取100mg 5-FOA冻干粉，用1ml无水DMSO充分溶解，配制成100mg/ml（100×）的储存液。短期频繁使用，置于4ºC避光保存；长期保存，根据单次用量分装冻存，-20ºC保存6个月有效。

2.2 根据实验室认可的方法，配制标准的酵母合成培养基（含琼脂粉），高压灭菌。放入转子一起灭菌以便后续搅匀组分用。

2.3 冷却到55ºC后加入任何热敏感组分（氨基酸，糖类或者其他成分）。

2.4 每升培养基加10ml100×5-FOA储存液，混匀后，倒平板。

常见问题（FAQs）：

Q1. 如何保存5-FOA？

A1. 5-FOA粉末可置于4°C短期保存，-20°C长期保存。根据产品特性溶解配置储存液，需避光置于4°C短期保存。小量分装后-20°C长期保存，可稳定保存6个月。

Q2. 5-FOA选择性培养基pH是多少？

A2.大于pH 4.5条件下5-FOA选择性被破坏，唯一的问题在于质子化形式的FOA会渗透进入细胞。一般情况标准配方配置的平板pH=2.8。在pH=6或6.2时5-FOA完全无活性，pH =5.4时5-FOA活性很好，pH=4或更低时5-FOA活性达到100%。正常情况配置5-FOA培养基不用调pH。

Q3.预制的5-FOA选择性平板能保存多久？

A3.绝大多数实验室保存5-FOA预制平板数月（3-6个月）。有的实验室数据显示能放9个月和＞12个月（4°C存放），圈上封口膜防止干燥。

Q4. 5-FOA使用浓度？

A4. FOA（1mg/ml）在酵母分子遗传学中常用作选择性试剂；在Ura+细胞群体重筛选出Ura-细胞；筛选酿酒酵母菌乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶（OMP脱羧酶）突变株。FOA（0.1mg/ml）用来正筛选尿嘧啶营养缺陷型的硫依赖型嗜热古细菌（Sulfolobus acidocaldarius）。

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