GUS Histochemical Stain Kit GUS染色试剂盒（组织化学法）

— — 转基因植物GUS表达活性定性研究

关键词：

β-glucuronidase (GUS) β-葡（萄）糖苷酸酶；X-Gluc；GUS活性检测；Histochemical 组织化学定位法；MUG；农杆菌介导的转基因植物研究；

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基本描述：

GUS，英文名β-glucuronidase，中文名β-葡（萄）糖苷酸酶，一种功能非常全面的报告基因检测系统，广泛用于植物分子生物学和微生物学研究。GUS基因融合系统，根据底物的类型，对细胞/组织或蛋白提取液的GUS酶活性进行定性或定量分析。组织化学方法（定性研究）用于GUS融合蛋白表达的亚细胞定位，多以X-Gluc为底物，因其能被水解生成一无色的葡萄糖醛酸和一肉眼可见的氯-溴靛蓝（chloro-bromoindigo）深蓝色沉淀。荧光分析法（定量研究）则用于GUS融合蛋白表达水平的研究，常以MUG为底物，因其能被水解生成一无色的葡萄糖醛酸和一荧光产物4-MU（4-甲基伞型酮），蓝色荧光（Ex= 365nm，Em= 445nm）。

由于绝大多数植物细胞内不存在内源性的GUS活性，因此，GUS广泛用作转基因植物的报告基因，特别是外源基因瞬时表达的转化实验。

产品特点：

本试剂盒以X-Gluc为显色底物，用于GUS融合蛋白的组织化学染色（定性研究）。另，该试剂盒含染色所需的所有试剂，只需将X-Gluc溶液和GUS染色缓冲液按比例混合即可制备成GUS染色工作液。该试剂盒可制备50ml染色工作液。具有操作简单、快速，稳定，且低背景的优点。

产品组分：

产品使用：

一、X-Gluc（50×）溶液的配制

1）于实验前提前将X-Gluc Substrate（组分A）、GUS Stain Buffer（组分C）置于室温回温至少20min；

2）低速离心组分A，X-Gluc Solvent（组分B）。然后将所有的组分B加入组分A，低速漩涡至粉末完全溶解，即配制X-Gluc（50×）溶液，根据单次用量，-20℃避光保存。

【注意】：正常X-Gluc（50×）溶液呈无色，若溶液变为红色或棕色，说明其失效。

二、GUS染色工作液的配制

按照以下比例，混合制备GUS染色工作液。建议现配现用。

三、GUS染色步骤

1）取材：将根茎、叶片、花瓣等组织剪成小片，放到1.5ml离心管；

【注意】：染色用植物材料的制备方法根据特定组织和器官类型而有差异。对于拟南芥的根/花/叶片，以及烟草幼苗的根，可以不做任何预处理直接进行染色；但是，对于烟草和马铃薯的茎和叶片需要先剪切成薄片（~1-3mm）再进行染色。而，更大的组织样品，需用真空渗透法来促进染色工作液渗入细胞。

2）染色：加入适量体积现配好的染色工作液，以完全覆盖材料为准。铝箔纸包好，室温孵育3h-过夜。同时设置阴性和阳性对照实验；

3）脱色：将染色好的材料转入70%酒精中脱色2-3次，直至阴性对照材料变为白色。GUS染色阳性的蓝色斑点非常稳定，不会被酒精脱色。

4）观察：大部分GUS染色阳性的蓝色斑点肉眼能观察到，然而，有些材料可能蓝色斑点很细微，需要显微镜下才能观察到。【注意】：白色背景上的蓝色斑点即为GUS表达位点。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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引用文献：

[1] MM1001-1KIT GUS Histochemical Stain Kit GUS染色试剂盒（组织化学法）

Wang, K., Zhao, X., Pang, C. et al. IMPERFECTIVE EXINE FORMATION (IEF) is required for exine formation and male fertility in Arabidopsis. Plant Mol Biol 105, 625–635 (2021). https://doi.org/10.1007/s11103-020-01114-8

[2]The procedure for GUS staining is briefly described here. The inflorescence was immersed in the GUS dye containing X-gluc (50 ×) and GUS stain buffer (MKbio, China) and incubated at 37℃overnight. After decolorization by 70% alcohol, tissues were observed with a Leica microscope (Leica, USA).