Collagenase II 胶原酶II型

产品标签

Collagenase II 胶原酶II；Collagenase NB 4 胶原酶NB4（标准级别）；SERVA Electrophoresis；Dispase II 中性蛋白酶；Roche；CAS：9001-12-1；

产品信息

【温馨提示】：关于胶原酶的酶活，官网列出的≥125 CDU/mg 冻干物，为最低质控标准；实际批次酶活整体来说：远高于最低质控值。若有需要，可咨询业务员具体酶活。

产品描述

胶原酶（Collagenase，CAS NO. 9001-12-1）是一种蛋白水解酶，常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶，胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列（高频出现在胶原collagen，很少在其他蛋白中发现）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。不同于其他蛋白酶，胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维，这种胶原纤维广泛存在结缔组织。

商业化胶原酶来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有梭菌蛋白酶A（Clostridiopeptidase A），能够降解天然胶原和网状纤维；还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异分为五类，其在应用上具有一定区分，详见附录1。

本品是II型胶原酶，活性≥125 CDU/mg冻干物，比I型胶原酶含更高的梭菌蛋白酶活性，通常用作心脏、骨、肝、甲状腺、唾液腺和软骨等组织的原代细胞制备。

产品特性

1）EC NO：3.4.24.3

2）CAS NO：9001-12-1 

3）酶活力单位定义：在37℃，pH7.4，Ca2+的条件下，5h内水解牛跟腱胶原产生多肽量相当于1µmol亮氨酸茚三酮颜色变化所需的酶量定义为1个胶原消化单位（collagen digestion unit，CDU）。

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

一、储存液制备

1）直接往100mg胶原酶内加入100µl含钙镁的HBSS缓冲液，轻轻漩涡震荡确保完全溶解混匀。

2）根据具体批次的酶活力，用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/µl（1000×储存液），之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。

3）立即使用或将储存液根据单次用量分装，置于-20℃避光保存。

4）使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。

二、组织分离

1）用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次；

2）加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片，之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶；

3）37℃孵育4-18h，置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。

4）将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

5）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

三、器官灌注

1）将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液，使其浓度为50-200U/ml，或根据具体实验体系调整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。

2）按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注；

3）将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

4）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录1

表1 几种胶原酶特征和应用比较

相关产品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

应用文献：

[1]  Jiang H, Guo Y, Yu Z, Hu P, Shi J. Nanocatalytic bacteria disintegration reverses immunosuppression of colorectal cancer. Natl Sci Rev. 2022 Aug 29;9(11):nwac169. doi: 10.1093/nsr/nwac169. PMID: 36381212; PMCID: PMC9647001.

Collagenase IV (MX1004), Hyaluronidase (MX1007) and Deoxyribonuclease I (MF0402) were purchased from Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd..

[2]  Xiong FQ, Zhang W, Zheng C, et al. Gemcitabine-loaded synthetic high-density lipoprotein preferentially eradicates hepatic monocyte-derived macrophages in mouse liver with colorectal cancer metastases. Acta Pharmacologica Sinica. 2023 Nov;44(11):2331-2341. DOI: 10.1038/s41401-023-01110-w. PMID: 37225846; PMCID: PMC10618456.

Collagenase I, Collagenase II, and CFSE were purchased from Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd (Shanghai, China).

[3] Chenshuang Zhang  et al. Prevent and Reverse Metabolic Dysfunction-Associated Steatohepatitis and Hepatic Fibrosis via mRNA-Mediated Liver-Specific Antibody Therapy. ACS Nano 2024, 18, 50, 34375–34390

Collagenase I  and d-luciferin potassium salt were obtained from Shanghai Maokang

Biotechnology Co., Ltd.