CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

细胞增殖与示踪检测试剂盒

产品关键词：

CFDA, SE；Calcein AM 钙黄绿素；Cell Division 细胞分化（分裂）；Fluorescein diacetate (FDA)；PKH26；CAS NO：150347-59-4；

产品信息

【温馨提示】：见我司懋康生物（maokangbio）提供的CFDA SE 超纯冻干粉末（#MX3009-5MG）。

【温馨提示】：见我司懋康生物（maokangbio）提供的PKH26红色荧光探针用于常规细胞膜标记（#MX4021-100UL）。

产品描述

CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒（CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit）是一款基于荧光探针CFDA, SE，用于细胞增殖检测和细胞荧光示踪的检测试剂盒。此方法目前广泛替代MTT法或者3H-胸腺嘧啶核苷掺入法（3H-thymidine incorporation）等细胞增殖检测方法。本试剂盒包含粉末形式的CFDA, SE探针，细胞培养级的溶剂，以及细胞标记液，使用方便，操作简单。按照每个样本的标记体积为1ml来算，我司（懋康生物）提供两种规格的试剂盒，分别可检测500个和1000个样品。

CFDA, SE，英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester，CAS NO. 150347-59-4，是一种稳定的、细胞膜渗透性的非荧光染料，由两个醋酸基团和一个琥珀酰亚胺酯（SE）官能团组成的一个荧光分子。一旦主动扩散进入细胞，其醋酸基团被胞内酯酶切割，生成荧光素酯CFSE。CFSE具有高度荧光，且能通过其琥珀酰亚胺酯基团共价结合到细胞内的蛋白氨基基团。正是这个共价偶联反应，CFSE能够极其长期的保留在细胞内，长达数个月。另外，归因于这一稳定连接，一旦染料进入细胞，不会转移到邻近细胞。无活力细胞仍然是非荧光。而活细胞一旦分化，CFSE能够很均匀的分散到子细胞中，每分裂一次子代细胞约能得到亲本细胞1/2的荧光强度，因此，通过流式细胞仪对荧光强度的检测，能够依次分选出未分裂细胞，分裂一次的细胞（1/2荧光强度），分裂两次的细胞（1/4荧光强度），分裂三次的细胞（1/8荧光强度），以及以此类推其他分裂次数的细胞。CFSE可以检测分裂多达8次或更多次数的细胞增殖。

CFSE广泛用于细胞增殖和体内细胞示踪研究。CFSE的最大激发和发射波长分别为492nm和517nm，标记细胞后呈绿色荧光。使用流式细胞仪检测可用FL1检测通道。也能用荧光显微镜观察，使用FITC滤片。

产品包装

保存与运输方法

保存：-20ºC保存，开封前1年有效，其中组分A（CFDA SE粉末）需严格避光，组分B避免强光照射。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   CFDA SE溶剂在低温（如4℃，冰浴）等条件下会凝固而粘在离心管底、管壁或盖子上，可将其置于25℃温育片刻直至全部融解后使用。

2）   CFDA SE粉末经溶剂溶剂配制成储存液后一个月内用完最好，最多不超过三个月。因CFDA SE容易被水解，并在水溶液中变质。使用过程中尽量避免接触水。而在标记过程中接触到水是在允许范围内。

3）   荧光染料均存在淬灭问题，操作和储存过程中需注意避光，以减缓荧光淬灭。

4）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.      CFDA SE储存液（1000X）制备

a）   将低温保存的CFDA SE粉末置于室温回温至少20min，之后短暂低速离心，让所有粉末都掉落至管底。同时也提前将CFDA SE溶剂置于室温或25℃水浴片刻直至充分融解。

b）   吸取一定量CFDA SE溶剂（比如400μl）到CFDA SE粉末中，充分溶解，短暂低速离心，之后全部转移到剩下的CFDA SE溶剂中，混匀后，此即为CFDA SE储存液（1000X）。此配制过程需要避光。

c）   按照单次用量分装，用铝箔纸包好后，置于≤-20℃避光干燥保存，最好一个月内用完，最长不超过三个月。-70℃保存能适当延长保存周期。

2.      CFDA SE标记液（1X）制备

准备适量无菌的细胞培养级去离子水，根据实验需要用量，配制适量的CFDA SE标记液（1X）。比如，取10ml 细胞标记液（10X），加入90ml 去离子水，充分混匀后，即得到CFDA SE标记液（1X），短期置于4℃保存，长期不用可置于-20℃保存。

3.      染色步骤

a）   室温300×g离心细胞5min，吸掉上清。

b）   PBS或其他生理缓冲液清洗细胞以去除任何残留的血清蛋白。之后再同上离心吸掉上清。

c）   用1ml CFDA SE标记液（1X）重悬细胞，调整密度为1-5 x 106cells/mL，转移到15ml离心管内。

d）   用CFDA SE标记液（1X）将CFDA SE储存液（1000X）稀释到2X。比如，取2μl CFDA SE储存液（1000X）到1ml CFDA SE标记液（1X），混匀后即为CFDA SE储存液（2X）。

e）   将1ml CFDA SE储存液（2X）加入到步骤c）中含1ml 待标记细胞的15ml离心管内，轻轻混匀。

f）    37℃避光孵育15min。【具体的孵育时间可根据实际情况做适当调整，常用孵育时间10-30min。】

g）   立即加入10ml完全细胞培养液（含血清）来淬灭染色过程，室温颠倒几次混匀。

h）   室温离心去上清，再用5-10ml完全细胞培养液清洗一次。

i）    再加入5-10ml完全细胞培养液，37℃孵育5min，以促进CFDA, SE在细胞内的充分反应和未反应的CFDA, SE重新回到完全细胞培养液中。离心去上清，完成最后一次清洗。

j）    之后用完全细胞液重悬细胞，此时可用荧光显微镜（Ex/Em=492/517nm，FITC滤片）或流式细胞仪（FL1通道）来观察标记效果。或开始用药物刺激处理或继续常规培养。经适当时间后用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于特定目的的细胞示踪。标记细胞也可用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。标记的细胞呈绿色荧光。

常见应用和数据示例：

根据荧光信号的稀释来检测细胞增殖和分化（示踪）（Cell proliferation and cell division by Dye Dilution Method），此方法主要用来体内外检测淋巴细胞（T细胞和B细胞）的增殖，也能用来检测NK细胞，成纤维细胞甚至细菌。也有用来研究可移植造血干细胞的增殖。

示例1（体外）.

Fig 1. Murine CD4+lymphocytes, labelled with CDFA-SE were cultured with antigen-presenting cells with different peptides to stimulate either the memory or the memory and naïve cells. Up to five cell divisions can be observed.

示例2（体内）.

Fig 2. Ability of CFSE-labeled ovalbumin (OVA)-specific T cell receptor transgenic CD8+ OT-I T cells, when adoptively transferred into C57BL/6 mice to respond to OVA, data shown 3 days after adoptive transfer. Left panel: CD8+, CD45.1+ OT-1 T cells in recipient mice. Right panel: CFSE proliferation profile. Note non-divided population of CD8+ T cells in recipient mice not receiving antigen (light grey histogram) and auto-fluorescence of non-labeled lymphocytes (dark grey histogram). The Figure depicts CD8+ T cells that have divided 1-6 times based on CFSE dilution peaks. [Quah BJ et al. The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation. J Vis Exp. 2010 Oct 12;(44).]

相关产品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。