Trypsin 1:250, Powder (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250（粉末）

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Trypsin 1:250 胰酶；Collagenase NB 4 胶原酶NB4（标准级别）；Trypsin-EDTA (0.25%)；Dispase II中性蛋白酶；Roche；CAS：9001-12-1；

产品信息

产品描述

胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），CAS：9002-07-7，来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶，由223个氨基酸残基组成的单链多肽，底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端，当两者之一紧随为脯氨酸的情况除外。另外，当切割位点任一边紧邻酸性残基，胰酶水解速率也会减缓。

胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），以无活性的胰蛋白酶原（Trypsinogen）形式分泌于胰腺中，通过切割其末端六肽而得到活化，产生天然单链形式的β-胰酶（β-Trypsin），随后进行有限的自发裂解产生具水解活性的α-Trypsin（由二硫键共价连接的二条肽链组成）。胰酶水解活性可被多种化合物所抑制，有1）来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂；2）银离子；3）有机磷化合物，如氟磷酸异丙酯DFP；4）特定蛋白酶抑制剂，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、PMSF、TLCK等；

本品是来源于猪胰腺的胰蛋白酶冻干粉，经γ射线处理灭活病毒，经过猪细小病毒和支原体检测。基于标准测定方法的酶活力为250 units/mg，即1:250。广泛用于细胞传代，对贴壁细胞进行消化以制备单细胞悬液，常用的工作浓度是0.025-0.5%（w/v）。也可联合其他蛋白酶如胶原酶、弹性蛋白酶一起使用，以消化组织。

产品特性

1）  EC NO：3.4.21.4

2）  CAS NO：9002-07-7

3）  同义名：Trypsin, from Porcine Pancreas; Trypsin Powder, Porcine 1:250; Tryptase; Tryptar; Cocoonase; Parenzyme; Parenzymol;

4）  分子量：23.4 kDa

5）  螯合剂：无EDTA

6）  酚红指示剂：无酚红

7）  外观：白色至类白色粉末

8）  溶解性：溶于水，几乎不溶于乙醇和甘油

9）  最佳工作温度：37°C

10）最佳工作pH：7.0-9.0

11）酶活性：根据美国药典专论规定的胰蛋白酶活性测定条件（25°C 10 min，pH 7.6），1 g胰蛋白酶能消化250 g酪蛋白底物。

保存与运输方法

保存：2-8℃干燥保存，3年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

1. 胰酶储存液（2.5%，w/v）的配制

1.1 称取2.5g胰酶粉末溶于100ml不含钙镁的平衡盐缓冲液，如HBSS（Hank′s Balanced Salt Solution），并调整pH在7.4-7.6，此时得到的即2.5%胰酶储存液，置于4℃短时间保存，3个月相对稳定。建议分装冻存，利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀，属于正常现象，不会影响使用效力。

1.2 细胞的消化可以直接用胰酶溶液，但常使用胰酶-EDTA溶液，因为EDTA是一种II价金属离子螯合剂，能够螯合钙镁离子，减少细胞间的粘附性，从而增强胰酶活性。

【注①】：胰酶用于细胞传代的工作浓度范围为0.025%-0.5%，具体浓度的选择主要受胰酶活性、孵育时间和细胞系类型几个方面影响。若用过高浓度消化过长时间，会破坏细胞膜结构，进而杀死细胞。当对使用浓度把握不大，建议先使用低浓度消化，慢慢的摸索出合适的工作浓度。

【注②】：胰酶-EDTA溶液的配制（仅作参考，根据需要的实际胰酶浓度来调整）

1. 
   

2. 2. 贴壁细胞消化（培养板）

3. 2.1 吸掉培养板内培养液，用不含Ca2+/Mg2+的缓冲液清洗单层贴壁细胞，直至清除残余血清，吸掉盐溶液。

4. 2.2 向上述贴壁细胞中加入适量胰酶溶液或者胰酶-EDTA溶液，完全覆盖细胞即可。此时将细胞置于37℃培养箱孵育2min左右

5. 2.3 立即取出，倾斜培养板，吸掉胰酶或者胰酶-EDTA溶液，轻拍培养板，观察细胞的消化状态。若消化不够，可放回37℃培养箱短时孵育，直至细胞从表面脱落。整个消化过程可通过倒置显微镜来观察。

6. 【注①】：消化时间跟细胞类型、细胞密度、培养液内血清浓度、胰酶活性、以及消化前细胞培养时间等因素有关。胰酶对细胞的损伤以及消化时间尽量保持在最低水平】。

7. 2.4 加入含血清的适量培养液到消化好的细胞内，轻轻反复吹吸从而将细胞从培养板底尽可能吹离，以及吹散细胞团，吹洗时尽量避免气泡的产生。

8. 【注①】：血清能抑制进一步的胰酶消化，保护细胞不被过度消化。当使用无血清培养液，建议此时加入等摩尔的大豆胰酶抑制剂（Soybean trypsin inhibitor）以起到相同效果。

9. 2.5 进行下一步操作【亚培养，或细胞计数】或细胞冻存。

10. 【注①】：操作时务必小心谨慎，同时时刻注意避免交叉污染发生的可能性。

11. 
    

注意事项

1）胰蛋白冻干粉产品常遇到的活性定义及其转换，

1 BAEE Unit：在25℃，pH 7.6的条件下，以BAEE为底物，3.2 ml的反应体系中，A253吸光值每分钟会发生0.001的变化即为一个酶活单位。

1 TAME Unit：在25℃，pH 8.2，0.001M Ca2+条件下，每分钟水解1μmol p-toluenesulfonyl-L-arginine methyl ester（TAME）的用量。

1 USP Unit：在指定条件下，每分钟引起吸光值发生0.003的变化的样品活性。

1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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