| 目录号 | MP1503-100ML | 售价 | 225.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 100ml | 运输温度 | 冰袋 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱） | 保存温度 | -20℃冻存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 组织/细胞裂解液 | 订购数量 |
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产品简介:
RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱）
产品标签： RIPA Lysis Buffer RIPA裂解液；细胞/组织裂解液；总蛋白提取；BCA蛋白浓度检测试剂盒；Bradford蛋白浓度测定试剂盒；PMSF；
产品信息
【温馨提示】：见我司懋康生物（MKBIO）整理的组织/细胞裂解液重要特点以及选择指南。
产品描述 RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），本意为Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对组织和细胞都有较好的裂解作用。RIPA的配方有很多种，根据其裂解强度的不同，大致可分为强、中、弱三类，应用上会有一些差异【见附表1】。 本品为裂解性较温和的1×RIPA裂解液，主要成分为50mM Tris-HCl（pH 7.4），150mM NaCl，1%NP-40,0.25%脱氧胆酸钠，以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂，可广谱且有效抑制蛋白降解，经本品裂解所得的蛋白样品，适用于蛋白免疫印迹（Western Blot），免疫沉淀（IP），免疫共沉淀（Co-IP）等实验。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：MP1902-500T）测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度。
产品组成
保存与运输方法 保存：-20℃冻存，1年稳定。 运输：冰袋运输。
注意事项 1） 为了取得最佳的使用效果，建议第一次使用本品的时候将裂解液分装冻存，避免反复冻融。 2） 裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。 3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法 A， 培养的细胞样品 1） 充分融解RIPA裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF（100mM），使其最终浓度为1mM。 2） 贴壁细胞：吸除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可忽略此步）。按照六孔板的每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加量。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-3秒后，细胞就会被裂解。 悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。 3） 充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB、免疫沉淀和免疫共沉淀等实验。 【裂解液用量说明】：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
B， 组织样品 1） 将组织剪切成细小的碎片。 2） 充分融解RIPA裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF（100mM），使其最终浓度为1mM。 3） 按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以适当添加用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可适当降低用量。】 4） 用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解，此过程尽量控制在1-2分钟内，以减少蛋白的降解。 5） 充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀和免疫共沉淀等实验。 6） 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分，之后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。 【注意】：RIPA裂解液的裂解产物经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散这些透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。像检测一些常见的转录因子，例如NF-kB、p53，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
附表1. RIPA裂解液（强、中、弱）组分和应用差异
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
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