组织/细胞裂解液重要特点以及选择指南（MKBIO）

当前位置：首页> 资料中心> 常见问题 >组织/细胞裂解液重要特点以及选择指南（MKBIO）

时间：2018-10-04 作者：懋康原创文章来源：懋康生物

前言：

在免疫印迹（WB）、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP），以及染色质免疫沉淀（ChIP）等许多研究组织或细胞内蛋白表达，蛋白纯化以及蛋白-蛋白、蛋白-核酸间互作的各种免疫实验内，首先要做的第一步就是进行组织（细胞）裂解，通过破坏细胞膜或细胞核膜的屏障，将要待研究的对象释放到体外环境中。为此，拥有合适的组织/细胞裂解液是开展实验重要的一环。

针对各种下游实验的特点，懋康生物（MKBio）提供几种常见的组织/细胞裂解液，基本涵盖用户需求。

总表：各种组织/细胞裂解液主要特点和应用差异（MKBIO）

产品货号	MP1501	MP1502	MP1503	MP1504	MP1505	MP1506	MP1507	MP1508
产品名称	RIPA裂解液（强）	RIPA裂解液（中）	RIPA裂解液（弱）	WB/IP裂解液	NP-40裂解液	SDS裂解液	RIPA裂解液（强，无抑制剂）	WB/IP裂解液（无抑制剂）
有效裂解成分	1% Triton X-100，1%脱氧胆酸钠，0.1% SDS	1% NP-40，0.5%脱氧胆酸钠，0.1% SDS	1% NP-40，0.25%脱氧胆酸钠	1% Triton X-100	1% NP-40	1% SDS	1% Triton X-100，1%脱氧胆酸钠，0.1% SDS	1% Triton X-100
裂解强度	强	中	温和	温和	温和	强	强	温和
对膜蛋白的提取	很好	较好	一般	一般	一般	很好	很好	一般
对胞浆蛋白的提取	很好	很好	很好	很好	很好	很好	很好	很好
对核蛋白的提取	很好	较好	较好	较好	较好	很好	很好	较好
胞浆磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好	很好	很好	很好	很好	很好
核转录因子提取	很好	很好	很好	很好	很好	很好	很好	很好
蛋白酶抑制剂	含有	含有	含有	含有	含有	含有	不含	不含
磷酸酶抑制剂	含有	含有	含有	含有	含有	含有	不含	不含
主要用途	WB，IP	WB，IP	WB，IP，Co-IP	WB，IP，Co-IP	WB，IP，Co-IP	WB，ChIP	WB，IP	WB，IP，Co-IP

组织/细胞裂解液选择说明：

a）对于普通的WB，IP，Co-IP，推荐使用WB/IP裂解液（# MP1504-100ML），经此裂解所得的产物没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。另外，此裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的WB检测。

b）对于某些特殊蛋白的IP，如果WB/IP裂解液（# MP1504-100ML）效果不理想，可尝试用RIPA（强，中，弱）或NP-40裂解液。若发现IP背景很高，说明非特异性蛋白被沉淀下来，则需选用裂解强度较高的裂解液，如RIPA（强或中）。如果发现目的蛋白无法被沉淀下来，说明裂解液的强度过强，可使用较温和的裂解液如RIPA（弱）或NP-40裂解液。

c）对于某些难溶解蛋白的WB，如果WB/IP裂解液（# MP1504-100ML）效果不理想，可尝试使用裂解强度更高的裂解液如RIPA（强，中）或SDS裂解液。

d）对于特定用途需要自行添加特定抑制剂或不需添加抑制剂，可考虑选择RIPA裂解液（强，无抑制剂）（# MP1507-100ML）或WB/IP裂解液（无抑制剂）（# MP1508-100ML），后者很多情况下兼容酶活性和生物小分子的检测，具体兼容性如何请自行测试，我司无相应数据提供。

补充知识点

一、关于去垢剂（detergents）

1.1 去垢剂的分类

几种组织/细胞裂解液裂解强度（应用）的差异主要还是配方中去污剂种类和浓度的不同。去污剂分为变性去污剂（denaturing detergents）和非变性去污剂（non-denaturing detergents），前者可以是阴离子比如SDS，或阳离子比如乙基三甲基溴化铵，这些去垢剂总体来说破坏膜和通过打破蛋白-蛋白间相互作用来变性蛋白；非变性去垢剂分为非离子比如Triton X-100，胆盐比如胆酸盐类和两性离子去垢剂比如CHAPS。

1.2 常见去垢剂（用于蛋白增溶）的特征

去垢剂	类型	聚集数	胶束分子量	临界胶束浓度(CMC, mM)	临界胶束浓度(CMC, %，w/v)	浊点（℃）	透析去除
Triton X-100	非离子型	140	90,000	0.24	0.0155	64	否
Triton X-114	非离子型	/	/	0.21	0.0113	23	否
NP-40	非离子型	149	90,000	0.29	0.0179	80	否
Brij-35	非离子型	40	49,000	0.09	0.1103	>100	否
Brij-58	非离子型	70	82,000	0.077	0.0086	>100	否
Tween-20	非离子型	/	/	0.06	0.0074	95	否
Tween-80	非离子型	60	76,000	0.012	0.0016	/
Octyl Glucoside	非离子型	27	8,000	23-25	0.6716-0.7300	/	是
Octylthio Glucoside	非离子型	/	/	9	0.2772	>100	是
SDS	阴离子	62	18,000	288	6-8	0.1728-2304	是
CHAPS	两性离子	10	6,149	8-10	0.4920-0.6150	>100	是
CHAPSO	两性离子	11	6,940	8-10	0.5048	90	是

二、几个免疫实验的基本概念

免疫印迹（Immunoblotting）：又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。

免疫沉淀（Immunoprecipitation）：是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与蛋白A/G或二抗偶联的agarose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸5-10min，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）：是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。

染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation, ChIP）：是一种适用于研究蛋白质与生物体细胞中 DNA 相互作用的经典方法，这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。检测原理是当在活细胞状态下固定蛋白质－DNA 复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA 片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。