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Aureobasidin A (AbA) 金担子素 / 短梗霉素A/酵母单杂交-双杂交筛选标记
时间:2016-05-18     作者:懋康生物     文章来源:原创作品    

Aureobasidin A (AbA)金担子素A/短梗霉素A

——Clontech/Takara 酵母菌/真菌转化实验选择性抗生素/酵母单杂交/双杂交研究

 

搜索关键词:选择性抗生素;酵母菌转化系统【酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、念珠菌】;真菌转化系统【构巢曲霉、黑曲霉】;酵母单杂交/双杂交;AUR1基因;AURA基因;IPAC合成酶;AUR1-C突变基因;

                                                                             



基本描述:

金担子素A(Aureobasidin A,AbA),也称为短梗霉素A,一种来源于丝状真菌Aureobasidium pullulansNo. R106的环酯肽类抗真菌抗生素,在较低浓度(0.1-0.5μg/ml)下即可对酵母菌产生毒性,对该抗生素敏感的真菌包括:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(Aspergillusniger.)。金担子素AbA通过抑制真菌生长所依赖的肌醇磷脂酰神经酰胺合成酶(Inositol phosphorylceramide (IPC) synthase)活性,阻碍神经酰胺到肌醇磷脂酰神经酰胺的合成,导致鞘脂类物质的合成量不足,细胞膜破裂,进而杀死菌株。研究发现,来自酿酒酵母菌的AUR1和构巢曲霉的AURA基因,两者具有同源性,都能够编码IPC合成酶,对这两种基因的点突变,也都赋予菌株对AbA产生很强的抗性,比如:突变基因AUR1-C。

 

AbA用作选择性标记的应用和优势:

1.  酵母转化研究中,金担子素A(AbA)是一种非常有效的选择性标志;

2. 使用上基本不需优化条件,且创造极低背景。AbA抗性是酵母双杂交研究中理想的报告子,兼容于携带相应抗性的酵母单杂交/双杂交系统,并提供良好的筛选结果。

 

携带AbA抗性基因(AUR1-C)的商业化载体:

1. 大肠杆菌-酵母菌穿梭载体/大肠杆菌-曲霉穿梭载体(shuttle vector)

简单描述:pAUR载体系统包含六种大肠杆菌-酵母菌穿梭载体,每一种特别改造用于酿酒酵母、粟酒裂殖酵母或者构巢曲霉,这些载体都涵盖一个新型的药物抗性选择性标志(金担子素Aureobasidin A抗性),使得酵母菌或丝状真菌具有此抗性。

载体                  

货号         

规格         

特点

pAUR101 DNA

3600

20μg

在酵母细胞内不会自主复制,仅通过重组方法整合进入染色体才能保留在细胞内。染色体整合和酿酒酵母菌转化用载体。含来自酿酒酵母菌的AbA抗性基因-AUR1-C。大肠杆菌-酵母菌穿梭载体;

pAUR112 DNA

3601

20μg

含CEN/ARS区域,在酵母细胞内能自主复制,因此细胞分裂过程能保持稳定。含AmpR和URA3基因(尿嘧啶选择性标记),来自酿酒酵母菌的AbA抗性基因-AUR1-C。大肠杆菌-酵母菌穿梭载体;

pAUR123 DNA

3602

20μg

来自酿酒酵母菌的AbA抗性基因-AUR1-C。蛋白表达载体和来源于pAUR112的大肠杆菌-酵母菌穿梭载体;含用于酵母细胞蛋白表达用的ADH1持续性启动子;

pAUR135 DNA

3604

20μg

Vector for marker removal in S. cerevisiae;大肠杆菌-酵母菌穿梭载体;

pAUR224 DNA

3603

20μg

含来自粟酒裂殖酵母的AbA抗性基因-aur1R;蛋白表达载体,含粟酒裂殖酵母中发挥作用的CMV持续性启动子;

pAUR316 DNA

3605

20μg

构巢曲霉内能够自主复制;来自构巢曲霉的AbA抗性基因-aurAr以及AMA1区域(复制起始区)和AmpR;大肠杆菌-曲霉穿梭载体

 

2. 酵母报告基因载体(yeast reporter vector)

载体名称                    

特点                                                                                                                                          

备注                

pAbAi Vector

用于单杂交(one-hybrid)实验的酵母报告载体,可用来鉴定和分类DNA结合蛋白。特别设计兼容于Matchmaker Gold酵母单杂交筛选系统,顺式作用元件(靶向序列)可插入MCS用作诱饵以筛选GAL4 AD/cDNA融合文库;目标蛋白-DNA的相互作用驱动AUR1-C抗性基因表达,从而能筛选到AbA抗性酵母;

Matchmaker Gold酵母单杂交系统

p53-AbAi Vector

酵母报告载体,配合Matchmaker Gold酵母单杂交筛选系统的阳性对照载体;含p53结合序列(顺式作用元件);AbA抗性基因AUR1-C的表达受GAL4 AD-p53与p53结合序列的相互作用而诱发;p53-AbAi在酵母细胞内不能游离繁殖,仅当整合进入宿主染色体才可以稳定存在,通过载体上的URA3基因和酵母菌株上的非功能ura3-52 locus发生同源重组以实现整合。另,含Col E1复制起始子和AmpR,可实现大肠杆菌内的扩增和复制。

 

基本特性:

1)  同义名:短梗霉素A

2)  分子式:C60H92N8O11

3)  分子量:1100Da

4)  纯度:≥95%

5)  熔点:155-157℃

 6)溶解性:不溶于水,易溶于甲醇、乙醇(0.5-5mg/ml)

    

 

产品订购:更大订购或产品技术问题,请来电/在线咨询,电话:021-54736159 。网站:www.maokangbio.com

或直接参考Clontech官网:http://www.clontech.com/CN/Products/Protein_Interactions_and_Profiling/Yeast_Two-Hybrid/Aureobasidin?sitex=10022:22372:US

品牌        

货号        

产品名称                                                                 

规格         

价格(元)

货期       

Clontech

630466

Aureobasidin A for Yeast Two-Hybrid Studies

【1mg/ml in methanol特殊包装,经济实惠】

1mg

1400

现货

 

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