RNAi稳转株构建服务 - 上海懋康生物科技有限公司

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RNAi稳转株构建服务

时间：2016-05-11 作者：懋康生物

★ 服务描述
shRNA稳转株是指能持续稳定表达干扰特定基因shRNA的细胞。RNA干扰是基因功能研究中最常用的手段之一。懋康生物利用慢病毒将shRNA序列整合入细胞基因组，并通过慢病毒载体携带的抗性基因（通常为新霉素，嘌呤霉素，潮霉素）筛选出稳定转染shRNA的细胞，使其成为shRNA稳定转染细胞系。

★ 服务内容
1：shRNA干扰靶点序列的设计；
2：shRNA 慢病毒质粒的构建；
3：shRNA慢病毒包装与病毒滴度测定；
4：:病毒感染靶细胞并从RNA水平（Real-time PCR）和/或蛋白水平（Western Blot）验证干扰效果；

5：选出干扰效果最好的细胞，利用慢病毒载体携带的抗性基因筛选建立稳定细胞系；

★ 服务说明
1：我们的RNA干扰服务针对所有的哺乳动物细胞，暂不提供植物和原核生物的RNA干扰服务；
2：RNA干扰的对象可以是编码蛋白的mRNA序列，也可以是长的非编码RNA(lncRNA)序列；
3：针对不同的靶基因，我们一般设计3-4条干扰序列，保证至少有一条序列干扰效果大于70%（RNA水平）；
4：我们提供多个慢病毒干扰载体供客户选择（见下方载体信息）；
5：对于干扰效果的验证，客户可以选择只从RNA水平（或蛋白水平）进行验证，也可选择两个水平都进行验证（lncRNA无法从蛋白水平验证）；
6：靶细胞和Western Blot 实验需要的一抗由客户提供，也可委托我公司代购；
7：Real-time PCR采用SYBR Green 法三复孔进行干扰效果验证，确保实验结果真实可信；

★ 客户所得

1：构建好的慢病毒干扰质粒，剩余病毒及稳转株细胞；

2：完整的实验报告（包括实验材料，实验步骤，实验结果等）及慢病毒使用操作说明书一份；

★ 服务周期
从靶点设计到稳转株完成总共需要45个工作日；

★ 载体信息

载体编号	筛选标记		载体骨架主要元件
载体编号	荧光	真核抗性	载体骨架主要元件
pHY-LV-KD1.1	GFP	无	U6-shRNA-CMV-GFP
pHY-LV-KD1.2	RFP	无	U6-shRNA-CMV-RFP
pHY-LV-KD1.4	无	Puromycin	U6-shRNA-CMV-Puromycin
pHY-LV-KD2.1	GFP	无	U6-shRNA-EF1α-GFP
pHY-LV-KD3.1	GFP	无	U6-shRNA-UBC-GFP
pHY-LV-KD5.1	GFP	Puromycin	U6-shRNA-CMV-GFP-PGK- Puromycin
pHY-LV-KD5.2	RFP	Puromycin	U6-shRNA-CMV-RFP-PGK- Puromycin
pHY-LV-KD5.4	GFP	Puromycin	U6-shRNA-UBC-GFP-PGK- Puromycin