MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water)
MKRed核酸凝胶染料（效果同GelRed，DuRed）
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活动周期：2017.11.1-2017.11.15日 活动对象：仅限于生物相关行业老师（终端客户）参加，同行业公司或代理商请勿参与。 实验数据：只需与任何核酸凝胶染料（EB，GelRed，Goldview等）的比较实验图片，简单描述实验条件（凝胶类型，强度，染色方法），并附上你忠实的评价，即可享红包奖励啰。 特别声明：本活动的最终解释权归上海懋康生物科技有限公司所有。 |
搜索关键词：
MKRed 核酸凝胶染料；GelRed；DuRed；Ethidium Bromide, EB；Ames Test 艾姆斯试验法；GoldView；SYBR Green I；
订购信息： 【活动周期内按活动价执行】
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
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MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) MKRed核酸凝胶染料（效果同GelRed） |
MF0754-500UL |
500µl |
460 |
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MF0754-2500UL |
5×500µl |
1850 |
产品特征
□ 传统核酸染料（Ethidium Bromide, EB，溴化乙锭）的无毒安全替代品，经艾姆斯试验法测试认证。
□ 新型核酸染料（GelRed，DuRed）的同等优质替代品，经实验室内部测试认证【见图1】。
产品优势
□ 安全无毒：独特油性大分子，无法穿透细胞膜进入细胞；不易挥发，人体不会吸入；艾姆斯试验法（Ames Test）表明凝胶染色浓度下完全没有诱变性，与EB的强致癌性相比，是一种安全无毒的核酸染料。
□ 适用范围广：适用于琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳的dsDNA, ssDNA以及RNA染色。
□ 操作灵活简单：可选择电泳前（胶染法）或电泳后（泡染法）染色。使用方法同EB，GelRed，DuRed
，不用重新适应和摸索新的电泳和染色条件。
□ 检测方便：与EB具相同的光谱特征，使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪即可，无需更改滤光片和观察装置。标准EB滤光片或SYBR滤光片都适用。
□ 灵敏度高，对核酸迁移影响小：适用于各种大小片段的电泳染色。电泳条带不易完全，片段不易迁移，不像SYBR Green I，染料浓度高时会引起条带弯曲和迁移现象【见附件常见核酸染料的性能比较】。
□ 稳定性高：室温稳定保存一年，长期不用可置于+4℃保存二年。
□ 易去除，兼容性强：用酚/氯仿提取和乙醇沉淀，或商业化的胶回收试剂盒可轻易去除核酸中的染料；与常见的下游应用如克隆，连接和测序兼容。
应用示例：
图1. GelRed（Biotium）与MKRed（MKbio, Shanghai）的使用比较。1-6是不同上样量的Marker III（依次为100ng、50ng、12.5ng、6.25ng、3.125ng）；7-11是不同上样量的血液基因组DNA（依次为200ng、150ng、100ng、50ng、25g）。凝胶配制条件：往25ml凝胶溶液加入0.25g琼脂糖，微波炉加热至充分溶解，冷却至60℃左右，加入2μl GelRed或MKRed染料，混匀，倒胶。电泳条件：1%琼脂糖凝胶，150V，20min。
图2. EB（MPbio, USA）与MKRed（MKbio, Shanghai）的使用比较。1-5是不同管菌液的PCR产物（目的片段500bp左右）。凝胶配制条件：往20ml凝胶溶液加入0.2g琼脂糖，微波炉加热至充分溶解，冷却至60℃左右，加入2μl EB或MKRed染料，混匀，倒胶。电泳条件：1%琼脂糖凝胶，150V，25min。
常见问题
1. MKRed能用于ssDNA或RNA染色吗？
回复：MKRed能用于ssDNA和RNA染色，但对dsDNA的检测灵敏度比ssDNA或RNA高2倍。
2. MKRed与下游应用如克隆，连接或测序兼容吗？
回复：是的，建议用酚-氯仿提取和乙醇沉淀，或用商业化的胶回收试剂盒来去除DNA中的染料。
3. MKRed与什么上样缓冲液兼容？
回复：我们一般使用6×上样缓冲液（含15%甘油，7.5% Ficoll 400，0.05%溴酚蓝和0.1% Patent Blue VF）。上样缓冲液中若含SDS，可能会引起预制MKRed凝胶内的核酸条带发生弥散。若发生这种情况，建议使用泡染色对核酸染色。
4. 是否能将MKRed加入DNA中，然后进行电泳检测？使用浓度多少？
回复：可以，使用浓度0.5×即可。但我们推荐用胶染法或泡染法来检测，能保证得到理想结果。
5. 哪种发射滤片适用于MKRed？
回复：使用EB滤片成像即可。SYBR滤片也能用于成像并得到较好的结果。
6. 电泳后的MKRed预制胶能重复使用？
回复：不建议如此使用，因再次电泳信号降低很明显。
7. MKRed的工作原理是什么？化学结构是什么？
回复：工作原理是通过专一嵌入并结合DNA。化学结构不对外公开。
8. 电泳过程中MKRed会发生迁移吗？
回复：和EB一样，MKRed不会迁移。没有必要加染料到电泳缓冲液中，用MKRed染色的凝胶比EB更加均化。
9. MKRed需要避光使用吗？
回复：MKRed非常稳定。可在室内光下使用，但染料建议避光保存。
10. 不小心将MKRed暴露在室内光下，是否还能用？
回复：建议MKRed避光长期保存。有客户不小心将其暴露在室内光下一个月，MKRed仍能很好的染色。
11. MKRed能用于甲醛、聚丙烯酰胺、DGGE、EMSA或PFGE凝胶？
回复：是的。有文献报道用MKRed的同类染料GelRed对乙二醛和甲醛琼脂糖凝胶进行RNA电泳染色（胶染法）。用泡染法对聚丙烯酰胺、DGGE和EMSA凝胶染色。对PFGE凝胶可用胶染法或泡染法。
12. MKRed能用于彗星实验（COMET assay）？
回复：是的，可用泡染法来染色。
保存：+4℃避光干燥保存，2年有效。
运输：室温运输。
注意事项
1） MKRed虽为安全无毒的核酸染料，对人无伤害，但请科研人员操作过程中注意防护，尽量避免与染料的直接接触。且染料的废弃需符合当地规定。
2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
一、胶染法（同EB，电泳前染色）
1. 制胶时加入MKRed 核酸染料（每50mL 琼脂糖溶液中加入5μLMKRed 10,000×水溶液）。
2. 按照常规方法进行电泳。
3. 用普通紫外凝胶透射仪（300nm处有最佳激发）观察以及标准EB滤光片成像。
1) 此方法比较节省染料，500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。
2) 由于MKRed具有良好的热稳定性，可以直接添加到热的琼脂糖溶液中而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将MKRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。
3) MKRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
4) 含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。
5) 如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。
6) 胶染法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
二、泡染法（电泳后染色）
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用H2O将MKRed 10,000×水溶液稀释约3,300倍制成3× 染色液（例如：将15μL MKRed 10,000×水溶液和5mL 1M NaCl混合，之后加到45mL H2O中混匀）。【注意】：染色液中加入0.1M NaCl能提高灵敏度，但如果胶染色再次使用会比较容易有沉淀产生。
3. 将凝胶小心地放入合适的容器中，缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的聚丙烯酰胺凝胶，染色时间通常介于30min-1h，丙烯酰胺含量增加，染色时间延长。
4. 不需要脱色，但若有需要可用水清洗一下凝胶以降低背景。
5. 用普通紫外凝胶透射仪（300nm处有最佳激发）观察以及标准EB滤光片成像。
【注意】
1） 用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。
2） 3× MKRed染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。
常用核酸染料的性能比较
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产品货号 |
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灵敏度 |
高 |
高 |
低 |
低 |
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稳定性 |
高 |
低 |
高 |
高 |
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对核酸迁移的影响 |
条带不易弯曲，片段不易迁移 |
染料浓度高时，条带易完全，迁移现象明显 |
条带不易弯曲，片段不易迁移 |
条带不易弯曲，片段不易迁移 |
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安全性 |
独特油性大分子，不挥发升华，不易吸入人体，不能穿透细胞膜，安全无毒。Ames Test表明染色浓度完全无诱变性，无致癌毒性。 |
花箐染料，能穿透细胞膜，但容易生物降解，不会在体内残留，安全无毒。 |
主要成分为吖啶橙，一种煤焦油提取物，具高毒，致癌，高诱变性。 易挥发升华，易吸入人体，能进入活细胞，不易被生物降解，长期留在体内。 |
分子量小，易挥发升华，易吸入人体，不易生物降解，体内长期残留。Ames Test表明容易引起突变，是强诱变剂，高致癌性。 |
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适用性 |
通用大小片段电泳染色。 与EB具相同的光谱特性，无需更改滤光片和观察装置。标准EB滤光片或SYBR滤光片都适用，使用普通紫外凝胶透射仪观察即可，300nm处得最佳激发。 |
100bp以上电泳染色。适用于254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
100bp以上电泳染色。使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
100bp以上电泳染色。使用普通紫外凝胶透射仪观察即可。 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
