Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯

最亮的Ca2+绿色荧光探针

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Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯；Fluo-2, AM；Fluo-2 Medium Affinity,Acetoxymethyl Ester;可见光激发波长Ca2+荧光探针；Fluo-3；Fluo-4；高通量筛选 HTS Screen Assay；

Fluo-8（Fluo-2 Medium Affinity），是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针，其荧光强度比Fluo-4强两倍，比Fluo-3强四倍。Fluo-8具中等程度的Ca2+亲和力，几乎接近Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM），使用上几乎同Fluo-3和Fluo-4。

Fluo-8不仅维持Fluo-3，Fluo-4便捷的光谱检测特性，与Ca2+结合后的最大激发波长为490nm，最大发射波长为514nm。而且具有改善的细胞载入和Ca2+响应能力。Fluo-8加载具较弱的温度依赖性，在室温或37℃孵育皆染色良好，不像Fluo-3，Fluo-4严格要求在37℃孵育，此特征使其更适用于HTS高通量筛选实验。Fluo-8应用广泛，与许多细胞系和靶向样本兼容，不会受配体或靶标本身信号干扰。Fluo-8可通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜等来检测胞内钙离子水平的变化。Fluo-8, AM是Fluo-8的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

可见光激发Ca2+荧光探针的优势：

与紫外光激发的荧光探针相比，如Fura-2和Indo-1，可见光激发Ca2+探针具有以下特点：

1）适用于大多数的激光共聚焦测钙系统，包括共聚焦激发扫描显微镜以及流式细胞仪等。

2）具有更强的染料吸收性能，使得更低浓度的探针即可成功检测Ca2+变化，从而降低对活细胞的光毒性。

3）Ca2+依赖性荧光强度增强，对Ca2+变化水平检测敏感度更高。

4）降低样品自荧光以及光散射的干扰。

5）兼容光激活探针以及UV-激发试剂，因此更方便于多参数检测。

6）无光谱偏移。

Fluo-8, AM相比较于Fluo-3，Fluo-4的优势：

1）目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针，荧光强度是Fluo-4的两倍，Fluo-3的四倍；

2）荧光探针加载更灵活快速，室温或37℃孵育染色效果好，不像Fluo-3、Fluo-4严格要求在37℃孵育；

3）维持Fluo-3、Fluo-4的检测光谱特性，与Ca2+结合后的最大激发波长为490nm，最大发射波长为514nm。4）50μg小包装供应，使用方便，且能很好保证产品的稳定性。

Fluo-8, AM的应用图片：

Fig. 1,U2OS cells were seeded overnight at 40,000 cells per 100 µL per well in a 96-well black wall/clear bottom costar plate. The growth medium was removed, and the cells were incubated with 100 µl of 4 µMFluo-4, AMorFluo-8, AMin HHBS at 37 °C, 5% CO2incubator for 1 hour. The cells were washed twice with 200 µl HHBS, then imaged with a fluorescence microscope using FITC channel.

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