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Luc报告基因底物/ D-Luciferin荧光素钾盐/超纯级别
时间:2016-06-24     作者:懋康原创     文章来源:懋康生物    

Luc 报告基因底物/ D-Luciferin D-萤火虫荧光素钾盐

活体成像研究/体外生物发光研究/转录水平研究


搜索关键词:

Luc reporter gene 报告基因;In vivo imaging 活体成像研究;转录水平研究;荧光素酶/ATP水平研究;报告基因质粒;报告基因病毒颗粒;萤火虫荧光素;甲虫荧光素;CAS:115144-35-9;


基本描述:

D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,D-荧光素(底物)被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染进入细胞后,导入研究动物如大小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。


基本应用:

D-荧光素也常用于体外研究,包括荧光素酶和ATP水平分析;报告基因分析;高通量测序和各种污染检测。


常见商业化类型的差异(荧光素钾,钠,游离酸):

目前市场上有三种产品形式,D-荧光素(游离酸),D-荧光素(钠盐),和D-荧光素(钾盐)。这三种产品主要差别在于溶解特性。

1)D-荧光素(游离酸)在水以及缓冲体系内的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO(50 mg/ml)。

2)D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成溶液后的三种产品,在绝大多数应用上都没有实质性的差别。

3)D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)基本上没有差别,主要是使用习惯等因素影响。整体来看,钾盐的应用文献明显多于钠盐。


D-荧光素钾盐基本特性:

1)CAS NO:115144-35-9

2)化学名:4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt,D-Luciferin firefly, potassium salt

3)分子式:C11H7N2O3S2K

4)分子量:318.42 g/mol

5)纯度:>99% (HPLC),分子生物学级(超纯)

6)外观:浅黄色至黄色粉末

7)溶解性:溶于水(60 mg/ml)


使用方法:

A.体外生物发光检测

1)储存液制备

用蒸馏水溶解D-荧光素(钾盐),配制成15mg/ml的储存液(100×),混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。建议使用的工作液浓度为150µg/ml(相当于468µM)。

2)荧光素酶反应缓冲液制备

配方【1×,参考Yuichi Oba, et al., 2003】:100mM Tris-HCl(pH 7.8),5mM MgCl2,250µM CoA,150µM ATP。具体缓冲液组成可参考其他文献资料来调整。按照以上配方制备荧光素酶反应缓冲液(2×)。

3)收集细胞裂解上清(荧光素酶表达)

根据需要检测的细胞类型,选择合适的裂解液进行细胞裂解,离心收集上清后续检测待用。

4)萤火虫荧光信号检测

【注①】:萤火虫荧光信号的检测方法大体上取决于冷光测定仪(luminometer)类型(是手动型荧光计、单管注射型或者酶标板读数型荧光计)。根据特定发光测定仪,来考虑注射用量和程序设置。

【注②】:需设置不含荧光素酶的孔(用作阴性对照),以测定背景荧光。

例:注射式冷光测定仪(injectible luminometer,单样或微孔板,200µl终体积)

a)吸取100µl荧光素酶反应缓冲液(2×)到一干净的冷光测定仪比色皿或96孔板的各孔(最好使用全白平底的96孔板);

b)吸取50~98µl裂解上清到皿或孔内;

c) 如果有需要,用水来补足使得总体积到198µl;

d)设置程序注射2µl荧光素储存液(使工作浓度150µg/ml),程序:2~5秒延迟(delay),之后10s测定。


B.活体成像分析

1)用无菌的PBS(w/o Mg2+)或者DPBS(w/o Mg2+)配制D-荧光素(钾盐)工作液(15mg/ml),0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。一旦使用,放到4℃解冻,保持冰冷且避光。

2)注射量取决于注射方式,具体如下:

注射方式

剂量

静脉注射(25-27 gauge针头)    

按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液    

腹腔注射(25-27 gauge针头)

按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液

肌肉注射(27 gauge针头)

50µl,浓度为1-2mg/ml荧光素工作液

鼻内注射(pipette)

50µl,浓度为3mg/ml荧光素工作液

3)注射入体内10-20 min(待光信号达到最强稳定平台期),再进行成像分析。

注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

 

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货号

产品名称

规格

价格(元)    

货期            

MX4603-100MG     

D-Luciferin, Potassium Salt  D-荧光素(钾盐)     

100mg          

998

现货

MX4603-500MG

D-Luciferin, Potassium Salt  D-荧光素(钾盐)

500mg

2500

现货

MX4603-1G

D-Luciferin, Potassium Salt  D-荧光素(钾盐)

1g

4500

现货

MX4603-5G

D-Luciferin, Potassium Salt  D-荧光素(钾盐)

5×1g

20200

现货

MX4603-10G

D-Luciferin, Potassium Salt  D-荧光素(钾盐)

10×1g

36400

现货

 

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货号

产品名称

规格       

价格(元)   

货期         

MX4602-100MG     

D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐)

100mg

998

现货

MX4602-500MG

D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素(钠盐)

500mg

2500

现货

MX4601-250MG

D-Luciferin Firefly, Free Acid D-萤火虫荧光素(游离酸) 

250mg

1800

现货

MX4604-10MG

DMNPE-caged Luciferin D-荧光素(DMNPE笼闭)

10mg

1350

现货


注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


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