目录号 | MX3249-100T | 售价 | 220.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 100T | 运输温度 | 冰袋 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | AO/EB细胞双染试剂盒;吖啶橙/溴化乙锭双染试剂盒; | 保存温度 | 4~25℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 1年 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 细胞凋亡、坏死检测 | 订购数量 |
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产品简介: AO/EB Double Staining Kit AO/EB双染试剂盒
关键词: 吖啶橙(Acridine Orange,AO);溴化乙锭(Ethidium Bromide, EB);Apoptotic cell凋亡细胞;Necrotic cells坏死细胞;Annexin V/PI细胞凋亡双染;
产品信息
产品描述 吖啶橙(Acridine Orange,AO)是一种异染的核酸结合染料,具细胞膜渗透性,通过插入或静电吸引的方式与DNA或RNA结合。当与双链DNA(dsDNA)结合发射绿色荧光(Ex/Em=502/525nm),与单链DNA(ssDNA)或RNA结合发射红色荧光(Ex/Em=460/650nm),少量结合呈橙红色荧光。溴化乙锭(Ethidium Bromide, EB)是一种多环芳烃荧光小分子和核酸插入剂,嵌合到双链DNA或RNA的碱基对内,无碱基特异性,呈红色荧光((Ex/Em=518/605nm)。EB不具细胞膜渗透性。
吖啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)常常联合使用来观察细胞核变化和凋亡小体形成,这些都是凋亡的特征。两者结合能区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。工作原理在于吖啶橙能同时染活细胞和死细胞,EB只能对丧失膜完整性的细胞进行染色。活细胞呈均匀的绿色。早期凋亡细胞呈绿色,并且在细胞核能看到亮绿色的点,由于染色体浓缩和核断裂。晚期凋亡细胞也会被EB着色,从而染成橙红色,但,与坏死细胞相比,晚期凋亡细胞会有浓缩和常常断裂的核。坏死细胞也被染成橙红色,但会有和活细胞相似的核形态,没有浓缩的染色体。
我司(懋康生物)提供的AO/EB双染试剂盒(AO/EB Double Staining Kit)提供完整的试剂,操作简单,根据说明书操作能做100个反应。
产品包装
保存与运输方法 保存:4-25℃避光保存,详见瓶上标签。1年有效。 运输:冰袋运输。
注意事项 1)AO与EB都有一定毒性,请小心操作。 2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法 1.染色工作液的制备 于正式实验前,取吖啶橙染液(试剂A)、溴化乙锭染液(试剂B)、稀释缓冲液(试剂C),按照A:B:C=1:1:8的比例稀释成所需的AO/EB染色工作液。
2.细胞准备 贴壁细胞:按照常规方法消化。于1000rpm离心5min,收集细胞沉淀,用PBS清洗一次。 悬浮细胞:于1000rpm离心5min,收集细胞沉淀,用PBS清洗一次。 之后用稀释缓冲液(试剂C)重悬细胞,细胞计数,调整细胞密度为0.5-5×106个/ml。
3.染色 每25μl细胞悬液中,加入2μl新鲜制备的AO/EB染色工作液,轻轻混合均匀。室温孵育5~10min。
4.观察 取干净载玻片,滴加5~10μl染色的细胞悬液,盖上盖玻片。使用荧光显微镜的荧光素滤片和60倍放大的物镜来观察和计数。该测定至少重复三次,每次观察的总细胞至少100个。 【注意】:根据细胞类型选择理想的物镜放大倍数(更高或更低),前提是必须看清核形态。
应用示例(来自文献): 文献:Dual AO/EB Staining to Detect Apoptosis in Osteosarcoma Cells Compared with Flow Cytometry.
染色方法:Dual fluorescent staining solution (1 μl) containing 100 μg/ml AO and 100 μg/ml EB (AO/EB) was added to each suspension and then covered with a coverslip. The morphology of apoptotic cells was examined and 500 cells were counted within 20 min using a fluorescent microscope (OLYMPUS). Dual acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) staining method was repeated 3 times at least.
Fig. (A)阴性对照细胞(正常细胞):环形细胞核均匀分布在细胞中央。(B)实验组(早期凋亡细胞):吖啶橙(AO)染色后的细胞核呈黄绿色荧光,以月牙形或颗粒的形态聚集位于细胞的一边。(C)实验组(晚期凋亡细胞):经EB染色后的细胞核呈橙红荧光,集中聚集且偏重定位。(D)坏死细胞:坏死细胞体积增加,显示平整的橙红色荧光和不清晰的轮廓。细胞正要溶解或接近崩溃。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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