PEI 25K Transfection Reagent

线性化聚乙烯亚胺转染试剂

搜索关键词：

PEI25K;PEI 25000;PEI 40K;线性化聚乙烯亚胺PEI；PEI转染试剂；PEI 25000；CAS：9002-98-6, 26913-06-4；Polysciences;

产品信息

【温馨提示】：见我司整理的线性化聚乙烯亚胺PEI 25000/ PEI40000转染试剂专题。

产品描述

线性化聚乙烯亚胺PEI 25，000，一种高电荷阳离子聚合物，非常容易结合于高电荷阴离子基质。工业应用上，线性化PEI可改善负电荷染料的物理外观，以调整染料的化学特性和增强染料与固相基质的黏附能力，常用作黏附增强剂，作用同多聚赖氨酸（poly-lysine）；科研应用上，线性化PEI能与DNA或其他负电荷生物大分子简单结合，正是这一特性，使得成为一种非常行之有效的载体运输介质（Vector carrier），即转染试剂。

线性化聚乙烯亚胺PEI 25000（Polyethylenimine Linear, MW 25000）是一款优秀、低成本、值得信赖的瞬时性转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中，PEI在宽广的生产规模内（从96孔板到100L生物反应器）能提供连续性的高基因表达。

本品是PEI25K的无菌溶液，浓度为1mg/ml，直接使用即可。按照DNA：PEI25K=1：3的比例来操作，1ml本品足以用来转染330μg DNA，或者，6孔板内约做80-160次转染。

保存与运输方法

保存：-20℃保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）收到本品或第一次使用，请根据单次用量分装后置于-20℃冻存，尽量降低反复冻融次数。

2）本品为无菌溶液，请操作过程中执行无菌操作。

3）请务必使用高质量的无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA浓度，260nm / 280nm比值确定DNA纯度（比值应该在1.8～2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

4）使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。

5）对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高重组蛋白的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为60-80%。

6）对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。

7）推荐用商业化的无血清培养基比如Opti-MEM I来稀释DNA和PEI25K，制备转染复合物。

8）转染过程请不要使用抗生素。

9）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

一、操作方法（贴壁细胞）

1.1铺板

a）转染前18-24h进行铺板，调整合适的细胞密度（参考表1），使其在转染时细胞密度达60-80%。

【注意】：高血清水平会抑制转染效率，大多数情况，低血清水平（≤5%）能产生最高的转染效率。

1.2转染步骤（以6孔板的单孔为例）

a）转染前1-2h，每孔替换为3ml含2%血清的新鲜生长培养基。

b）制备PEI25K-DNA转染复合物（严格按照以下步骤进行）：①往300μl无血清培养基（比如：Opti-MEM I）加入2μg质粒DNA,低速混合/涡旋均匀；②往混合物内加入6μl PEI25K（1mg/ml）（DNA/PEI25K=1：3），低速涡旋5s；③无菌环境，室温静置30min以形成PEI25K-DNA转染复合物。④用移液枪上下吹打3次，轻轻混匀。

c）将PEI25K-DNA转染复合物转到孔内。轻轻晃动培养皿或轻微涡旋，使得复合物分散均匀。

【注意】：以上步骤可通过调整PEI25K-DNA复合物在无血清培养基内的体积（为培养总体积的10%）来进行放大或缩小（可参考表2）。

1.3 孵育

a）37℃，5% CO2培养箱内培养细胞，转染后12-18h，去除含PEI25K-DNA复合物的培养液，更换新鲜的生长培养基。

b）通常，转染后36-48h能检测到重组蛋白表达。一般在转染后72-96h能观察到最大水平的表达。

PEI25K客户使用案例（逐步增加中）

图片描述：以人结肠癌细胞（HCT116）为对象，按照质粒DNA：PEI 2,5000（MX2202-250MG）=1:4的比例制备转染混合物并转染进入HCT116细胞，36h后于荧光显微镜下观察转染效率（GFP，绿色荧光蛋白）。

【数据来源：厦门大学 于老师】

相关产品

  — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

      上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。