目录号 | MS5509-10ML | 售价 | 180.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 10ml | 运输温度 | 冻干粉室温运输;溶液冰袋运输; | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | 保存温度 | 冻干粉置于2-8℃干燥保存,2年稳定;溶液置于-20°C避光保存,一年稳定。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | 2478-38-8 | 有效期 | 1-2年 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 订购数量 |
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产品简介: Acetosyringone乙酰丁香酮 (农杆菌介导的转化增强剂)
产品标签 Acetosyringone乙酰丁香酮;Natural phenolic compounds天然酚类化合物;Vir(virulence)基因;Agrobacterium-Mediated Transformation农杆菌介导的转化研究;GUS瞬时表达;X-Gluc;CAS:2478-38-8
产品信息
产品描述 乙酰丁香酮(Acetosyringone,CAS:2478-38-8),也称为4'-羟基-3',5'-二甲氧基苯乙酮(4'-Hydroxy-3',5'- dimethoxyacetophenone),一种由受伤的植物细胞分泌的天然合成酚类化合物,最为熟知的生理功能是参与植物-病原菌识别过程。乙酰丁香酮可提高植物转化效率,作用机制在于其能诱导农杆菌Vir基因的转录和高效表达,刺激T-DNA转化并且整合进入植物基因组内。还可用于合成4-甲氧基查尔酮及其类似物,体外用作抗肿瘤药。 我司提供两种形式的乙酰丁香酮,达植物组织培养级别:一种以冻干粉形式提供,纯度≥98%;一种以溶于DMSO的无菌溶液形式提供,浓度为100mM。本品用于农杆菌介导的遗传转化研究中,常用工作浓度为50-200μM。
产品特性
1)CAS NO:2478-38-8
保存与运输方法 保存:冻干粉置于2-8℃干燥保存,2年稳定;溶液置于-20°C避光保存,一年稳定。 运输:冻干粉室温运输;溶液冰袋运输;
注意事项 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 储存液配制【针对冻干粉】
即得到100mM储存液。滤膜过滤除菌后,-20℃分装冻存。【注意:本品对热敏感,不可高压灭菌。】
【注意】:请勿对乙酰丁香酮做高压灭菌处理。
使用案例 【注意】:以下是农杆菌介导的真菌转化(Agobacterium-mediated transformation ofC. graminicola)操作步骤,仅作参考。具体步骤请根据实际情况调整。 1.1乙酰丁香酮储存液制备 称取392.4mg乙酰丁香酮(Mw:196.2g/mol)溶于12ml 95%乙醇,之后加入8ml无菌水,混匀后,即得到100mM储存液。滤膜过滤除菌后,-20℃分装冻存。 1.2转化步骤 S1:将已经转化有质粒的农杆菌(Agro)接种到添加有50mg/ml卡那霉素(按照500μl/500ml培养基)的LB固体培养基,29° C倒置培养48h。使用质粒-农杆菌为:pRAN-AgL-1. S2:使用无菌接种环,挑取快速生长的农杆菌克隆到5ml MMB肉汤(minimal media broth),添加有5 µl硫胺(1g/ml储存液)和5 µl卡那霉素(50mg/ml储存液)。29° C摇床上震动培养48h,230-250rpm。 S3:吸取150-200µl上述培养物到5ml诱导培养液(IM,Induction Media),添加有10 µl乙酰丁香酮(AS,100mM储存液)和5 µl硫胺(1g/ml储存液)。29° C于230-250rpm摇床上震动培养约6h,直至OD600至少达到0.25。 S4:吸取300µl上述Agro-IM培养物和100µl真菌孢子(浓度约106孢子/ml)到1.5ml离心管内共培养。此时可将管子在工作台上放置一会,此时需要将小片NC滤片(Millipore 0.45µm HA)铺到固体的IM培养基上,添加有200 µl乙酰丁香酮(AS,100mM储存液)和100 µl硫胺(1g/ml储存液),这个过程约20-25mins。 S5:吸取200-400ul共培养Agro/孢子到NC片膜上,并用无菌玻璃棒或无菌塑料片涂布均匀。将平板放到工作台或者常规真菌转化用的生长区域进行孵育2-5天。对照组只涂布孢子悬液到NC膜片上。 S6:使用无菌镊子转化12个上述培养的NC膜片到PDA培养基上,添加有噻孢霉素(终浓度:200µg/ml),羧苄青霉素(终浓度:250µg/ml),潮霉素B(终浓度:250µg/ml)。室温或者真菌生长需要的温度进行培养。 S7:最后将转化好的克隆接种到含有潮霉素B(终浓度:250µg/ml)的PDA培养基。
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