| 目录号 | MF2491-1000UL | 售价 | 396.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 10×100μl | 运输温度 | 干冰运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 保存温度 | -80℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 六个月有效 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 大肠杆菌化学感受态细胞 | 订购数量 |
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
产品简介: NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
产品标签： NovaBlue(DE3)；OverExpress C43(DE3)；BL21 (DE3)；表达感受态细胞；pET表达载体；
产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-54736159 。网站：www.maokangbio.com。
菌株描述 NovaBlue(DE3)菌株来源于K12菌株，具有极高的转化效率，能同时用于普通质粒的构建以及蛋白的原核表达。NovaBlue(DE3)菌株具四环素抗性，recA和endA的突变有利于插入DNA的稳定和高纯质粒DNA的提取。lacZΔM15的存在使其能用于蓝白斑筛选。 NovaBlue(DE3)菌株含DE3区，说明其染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。 NovaBlue(DE3)菌株基因型：F`[ proA+B+ lacIq ZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)
产品描述 本品是大肠杆菌NovaBlue(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
产品包装
保存与运输条件： 保存：-80℃保存，六个月有效。 运输：干冰运输。
注意事项 1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。 2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。 4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。 5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。 6） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 7） 诱导时，IPTG浓度范围可选：0.1~2mM。 8） 为了得到足量的蛋白，需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。 9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。 2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。 3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。
【注意】： a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。 b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。 c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
相关产品
附录I 蛋白诱导步骤（仅作参考） 1）从新鲜涂布平板上挑取一单克隆，转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。 2）37℃，200rpm摇菌培养过液。 3）将步骤2）中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内（建议使用500ml三角瓶培养）。 4）37℃，150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8（建议0.6，约2.5h）。 5）【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内，置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。 6）加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h，依蛋白而异。 7）37℃，120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间，建议作一个时间周期优化实验，范围从2~16h。 8）将培养物冰浴10min。4℃，5,000 x g离心10min收集菌株。 9）吸掉上清，将沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的温度）。
IPTG母液（1M）配制 称量2.38g IPTG（Mw: 238.30）溶于适量去离子水，充分溶解后，调整终体积到10ml，并过滤除菌，即得到1M ITPG母液。
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
