目录号 | MP7508-20T | 售价 | 680.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 20t | 运输温度 | 冰袋运输 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | 保存温度 | 室温密封保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 3个月有效 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 抗酒石酸酸性磷酸酶染色(定性) | 订购数量 |
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产品简介:
Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒
产品信息
【重要提示】:为了保证试剂盒的工作性能,本试剂盒开封后,于实验前严格按照说明书配制各底物反应液和反应工作液,配制的溶液请立即使用,当天一次用完。初次使用本试剂盒,先做2~3张片做预实验,之后尽快完成批量实验。
产品描述 酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP),是一类磷酸酯酶,在酸性条件下可以催化磷酸酯键的水解。酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中分子量从18kD到100kD不等。ACP主要分为两类,一类为抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP),一类为抗氟酸性磷酸酶(Fluoride resistant acid phosphatase,FRAR)。
TRAP是一种糖基化的含金属蛋白酶,在破骨细胞(Osteoclast)和破软骨细胞(Chondroclast)中高表达,在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的TRAP均在细胞滤泡中,并非释放到血液中。血液中TRAP绝大部分来源于破骨细胞,因此,测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。TRAP在细胞信号转导、细胞增殖和分化等方面起重要作用,也和活性氧产生和铁离子转运等有关。
本抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒(Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit, TRAP Stain Kit)以萘酚AS-BI为底物,酸性pH下被ACP水解生成磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中。若细胞内ACP含抗酒石酸活性,则呈阳性反应。本品可用于新鲜血涂片/骨髓涂片、细胞爬片、冰冻切片和石蜡切片中的破骨细胞染色。本试剂盒可染20~30张片。
产品组成
保存与运输方法 保存:室温密封保存,3个月有效。务必知悉:所有应用液配制后即可使用,务必当天用完。 运输:冰袋运输。
注意事项 1) TRAP染色液易失效,请务必现配现用。 2) GBC染色液请不要置于-20℃冻存,需2-8℃避光保存。 3) 样本需新鲜,取材后请立即处理,否则会影响酶活性。 4) 对于冰冻切片染色,应尽量减少切片在室温暴露的时间。 5) 对于血液涂片,推荐皮肤穿刺血涂片,晾干后及时染色 6) 本品不建议用于石蜡切片染色。 7) 组织固定需在4℃冰箱进行,时间不要超过24h,否则酶活性会减弱或消失。 8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
试剂准备 【务必知悉】:为了保证试剂盒的工作性能,本试剂盒开封后,于实验前严格按照说明书配制各底物反应液和反应工作液,配制的溶液请立即使用,当天一次用完。初次使用本试剂盒,先做2~3张片做预实验,之后尽快完成批量实验。 1、底物反应液B1 1.1甲液配制:临用前吸取甲粉溶解液(500μl)加入甲粉中,充分溶解,即得到甲液。 1.2乙液配制:临用前吸取乙粉溶解液(500μl)加入乙粉中,充分溶解,即得到乙液。 1.3使用前,再将甲液和乙液混合,即得到底物反应液B1。
2、底物反应液B2 临用前吸取丙粉溶解液(500μl)加入丙粉中,充分溶解,即得到底物反应液B2。
3、底物反应液B4 临用前吸取丁粉溶解液(500μl)加入丁粉中,充分溶解,即得到底物反应液B4。 操作步骤 实验前准备材料:蒸馏水,染缸,玻片,滴管,计时器,光学显微镜等
一、 样本染色前处理 1.1 血液及骨髓涂片 j 推片:取新鲜血液或骨髓3μl左右置于载玻片上,推玻片与载玻片保持30°,置于血滴的正前方,稍往后移与血液接触使后者沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前方滑动置铺满血膜为止。 k 自然晾干,再放入固定液中固定2~3min。 l 水洗约30~60s、稍微晾干(不易过分干燥)。 1.2 石蜡切片 j 二甲苯脱蜡5~10min,再换用新的二甲苯,重复一次。 k 无水乙醇5min,90%乙醇2min,70%乙醇2min,蒸馏水浸洗2min。 1.3 冰冻切片 j 回温:将低温保存的冰冻切片放置到切片架上于37℃回温约5~10min。 k 水合:将回温好的切片在水中浸泡1~2min。 l 固定:固定液固定5~10min。 m 水洗约30~60s、稍微晾干(不易过分干燥)。
二、 染色流程(染色缸孵育法) 2.1往染缸内加入30ml蒸馏水,37℃水浴10min。 2.2将现准备的底物反应液B1、B2、B3、B4依次加入预温的蒸馏水中。混匀即得到:反应工作液。 2.3将已固定、水洗且未完全干的玻片,立即放入反应工作液中,避光孵育60min。 2.4孵育完后,取出水洗1min,在玻片未完全干之前进行复染。用苏木素染色液复染1~2min或甲基绿染色液复染2~3min。(此处复染液二选一即可) 2.5孵育完后,取出水洗10s,在玻片未完全干之前,即可用光学显微镜观察或水溶性封固剂封片后待检。
三、染色结果
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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