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Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒
目录号 MP7508-20T 售价 680.00元
规格 20t 运输温度 冰袋运输
其他名称 保存温度 室温密封保存
CAS号 N/A 有效期 3个月有效
应用 抗酒石酸酸性磷酸酶染色(定性) 订购数量
产品简介:


Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit

抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒



产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒

MP7508-20T

20T

680

【重要提示】为了保证试剂盒的工作性能,本试剂盒开封后,于实验前严格按照说明书配制各底物反应液和反应工作液,配制的溶液请立即使用,当天一次用完。初次使用本试剂盒,先做2~3张片做预实验,之后尽快完成批量实验。

 

产品描述

酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP),是一类磷酸酯酶,在酸性条件下可以催化磷酸酯键的水解。酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中分子量从18kD到100kD不等。ACP主要分为两类,一类为抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP),一类为抗氟酸性磷酸酶(Fluoride resistant acid phosphatase,FRAR)


TRAP是一种糖基化的含金属蛋白酶,在破骨细胞(Osteoclast)和破软骨细胞(Chondroclast)中高表达,在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的TRAP均在细胞滤泡中,并非释放到血液中。血液中TRAP绝大部分来源于破骨细胞,因此,测量血液中TRAP可以了解破骨细胞的功能状态。TRAP在细胞信号转导、细胞增殖和分化等方面起重要作用,也和活性氧产生和铁离子转运等有关。


本抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒(Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit, TRAP Stain Kit)以萘酚AS-BI为底物,酸性pH下被ACP水解生成磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中。若细胞内ACP含抗酒石酸活性,则呈阳性反应。本品可用于新鲜血涂片/骨髓涂片、细胞爬片、冰冻切片和石蜡切片中的破骨细胞染色。本试剂盒可染20~30张片。


产品组成

组分编号

组分名称

组分规格

MP7508-A

固定液

1瓶(40ml)

MP7508-B

底物液

底物反应液B1

甲液

j 甲粉:1支

k 甲粉溶解液:1支(500μl)

乙液

l 乙粉:1支

m 乙粉溶解液:1支(500μl)

底物反应液B2

j 丙粉:1支

k 丙粉溶解液:1支(500μl)

底物反应液B3

1支(1ml)

底物反应液B4

j 丁粉:1支

k 丁粉溶解液:1支(500μl)

MP7508-C

苏木素染色液

1瓶(10ml)

MP7508-D

甲基绿染色液

1瓶(10ml)


保存与运输方法

保存:室温密封保存,3个月有效。务必知悉:所有应用液配制后即可使用,务必当天用完。

运输:冰袋运输。


注意事项

1) TRAP染色液易失效,请务必现配现用。

2) GBC染色液请不要置于-20℃冻存,需2-8℃避光保存。

3) 样本需新鲜,取材后请立即处理,否则会影响酶活性。

4) 对于冰冻切片染色,应尽量减少切片在室温暴露的时间。

5) 对于血液涂片,推荐皮肤穿刺血涂片,晾干后及时染色

6) 本品不建议用于石蜡切片染色。

7) 组织固定需在4℃冰箱进行,时间不要超过24h,否则酶活性会减弱或消失。

8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


试剂准备

【务必知悉】:为了保证试剂盒的工作性能,本试剂盒开封后,于实验前严格按照说明书配制各底物反应液和反应工作液,配制的溶液请立即使用,当天一次用完。初次使用本试剂盒,先做2~3张片做预实验,之后尽快完成批量实验。

1、底物反应液B1

1.1甲液配制:临用前吸取甲粉溶解液(500μl)加入甲粉中,充分溶解,即得到甲液。

1.2乙液配制:临用前吸取乙粉溶解液(500μl)加入乙粉中,充分溶解,即得到乙液。

1.3使用前,再将甲液和乙液混合,即得到底物反应液B1。


2、底物反应液B2

临用前吸取丙粉溶解液(500μl)加入丙粉中,充分溶解,即得到底物反应液B2。


3、底物反应液B4

临用前吸取丁粉溶解液(500μl)加入丁粉中,充分溶解,即得到底物反应液B4。

操作步骤

实验前准备材料:蒸馏水,染缸,玻片,滴管,计时器,光学显微镜等


一、 样本染色前处理

1.1 血液及骨髓涂片

j 推片:取新鲜血液或骨髓3μl左右置于载玻片上,推玻片与载玻片保持30°,置于血滴的正前方,稍往后移与血液接触使后者沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前方滑动置铺满血膜为止。

k 自然晾干,再放入固定液中固定2~3min。

l 水洗约30~60s、稍微晾干(不易过分干燥)。

1.2 石蜡切片

j 二甲苯脱蜡5~10min,再换用新的二甲苯,重复一次。

k 无水乙醇5min,90%乙醇2min,70%乙醇2min,蒸馏水浸洗2min。

1.3 冰冻切片

j 回温:将低温保存的冰冻切片放置到切片架上于37℃回温约5~10min。

k 水合:将回温好的切片在水中浸泡1~2min。

l 固定:固定液固定5~10min。

m 水洗约30~60s、稍微晾干(不易过分干燥)。


二、 染色流程(染色缸孵育法)

2.1往染缸内加入30ml蒸馏水,37℃水浴10min。

2.2将现准备的底物反应液B1、B2、B3、B4依次加入预温的蒸馏水中。混匀即得到:反应工作液。

2.3将已固定、水洗且未完全干的玻片,立即放入反应工作液中,避光孵育60min。

2.4孵育完后,取出水洗1min,在玻片未完全干之前进行复染。用苏木素染色液复染1~2min或甲基绿染色液复染2~3min。(此处复染液二选一即可)

2.5孵育完后,取出水洗10s,在玻片未完全干之前,即可用光学显微镜观察或水溶性封固剂封片后待检。


三、染色结果

阳性部位(酶活性部位)

鲜红色或深红色颗粒,定位胞浆

细胞核

蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)


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货号

名称

规格

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

 

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