Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（MS4301-1G）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。 

订购信息：

产品描述

具细胞膜渗透性的Mag-Fluo-4 AM是Fluo-4 AM（货号：MX4504-50UG）的一种结构类似物，对镁离子（Mg2+）和钙离子（Ca2+）的Kd值分别是4.7mM和22µM，是一种非常有用的细胞内镁离子指示剂和低亲和性钙离子指示剂。

产品特征

1）镁离子指示探针

Mag-Fluo-4与Thermo（invitrogen）公司的Magnesium Green indicator相比，具更加灵敏的Mg2+荧光反应。由于细胞内Mg2+的生理波动幅度通常很小，这一点点灵敏度的提高都是值得考虑的优势。与Fluo-4一样，Mag-Fluo-4在不含二价阳离子的情况下基本无荧光，一旦与Mg2+结合后，呈明显的荧光加强，但无光谱迁移（见下图）。

图. Mag-Fluo-4在0-50mM Mg2+溶液内的荧光发射光谱

2）钙离子指示探针

Mag-Fluo-4是Fluo-4的类似物，具有更低钙离子结合亲和性，特别适合用于检测1 µM~1 mM范围内的胞内钙离子水平。

产品特性

1） 同义名：Mag-Fluo-4acetoxymethyl ester,cell permeant

2） 分子式：C37H33F2NO18

3） 分子量：817.65g/mol

4） 外观：橙色固体

5） 纯度：≥90%

6） Ex/Em：494/516 nm

7） 溶解性：溶于DMSO

8） 化学结构式：

保存与运输方法

保存：-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fluo-4 AM，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μgMag-Fluo-4 AM（Mw：817.65 g/mol）溶于12μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fluo-4 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、Zheng JM et al. MagT1 regulated the odontogenic differentiation of BMMSCs induced byTGC-CM via ERK signaling pathway. Stem Cell Res Ther. 2019 Jan 31;10(1):48.

使用方法（细胞内镁离子水平的流式检测）：1）用生理培养液（120 mM NaCl, 20 mM HEPES, 4.7 mM KCl, 1.2 mM KH2PO4, 1.2 mM MgSO4, 1.25 mM CaCl2, and 10 mM glucose）于37℃预孵育BMMSCs细胞10min使其达到离子梯度的稳定和平衡；2）用DMSO配制Mag-Fluo-4-AM储存液1mM；3）取4ul Mag-Fluo-4-AM储存液（1mM）和5ul 20% F-127，加入1ml培养基内，充分混匀；4）取0.25ml 分散液加入0.75ml含细胞培养液，使得探针终浓度为1uM；继续孵育30min，之后清洗细胞3次，之后再孵育30min保证细胞内AM基团的完全去酯化；5）之后用流式细胞仪分析荧光强度（Ex/em:480/520nm）。

Fig 1. MagT1 knockdown reduced intracellular Mg2+ level in BMMSCs. Intracellular Mg2+ level was significantly reduced in MagT1 knockdown BMMSCs measured by indicator Mag-Fluo-4-AM using flow cytometry.

文献二、Ainbinder A et al. Role of Mitofusin-2 in Mitochondrial Localization and Calcium Uptake in Skeletal Muscle. Cell Calcium. 2015 Jan;57(1):14-24.

使用方法（肌浆钙离子的mag-fluo-4光度测定）：趾短屈肌（FDB）肌肉纤维用Mag-Fluo-4-AM（4 µM）室温加载20min，之后用加含25 µM BTS的无探针溶液清洗20min。之后对纤维进行电刺激，用一系列抽搐刺激（1 ms pulse at 2 Hz）或5个连续性的强直电刺激。mag-fluo-4用480±15nm激发和535±30nm发射检测。

Fig 2. Measurement of mitochondrial Ca2+ uptake during twitch stimulation in mt-pericam expressing CTRL and Mfn2 KD FDB fibers. A. Average (±SE) traces of mt-pericam fluorescence (402 nm excitation/515 nm emission) in CTRL (black circles) and Mfn2 KD (white circles) fibers during twitch stimulation. B. Average (±SE) relative change in mt-pericam fluorescence (ΔF/F) in CTRL and Mfn2 KD FDB fibers during twitch stimulation. C. Representative mag-fluo-4 traces during twitch stimulation of CTRL (black trace) or Mfn2 KD (grey trace) FDB fibers. D. Average (±SE) relative change in myoplasmic mag-fluo-4 fluorescence during twitch stimulation of CTRL or Mfn2 KD FDB fibers.

——Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

引用文献：

[1] Lin S, Yin S, Shi J, Yang G, Wen X, Zhang W, Zhou M, Jiang [1]X. Orchestration of energy metabolism and osteogenesis by Mg2+ facilitates low-dose BMP-2-driven regeneration. Bioact Mater. 2022 Mar 24;18:116-127. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.03.024. PMID: 35387176; PMCID: PMC8961427.

Measurement of Mg2+ entry and mitochondrial Mg2+ intake was conducted through confocal laser scanning microscopy (CLSM, Leica, Germany). BMSCs were incubated with the Mg2+ probe Mag-Fluo-4 AM (2.5 × 10−6 mol L−1, green fluorescence, MKBio, China) and the mitochondrial indicator MitoTracker Red CMXRos (0.5 × 10−6 mol L−1) in growth medium at 37 °C for 30 min. 

 Mag-Fluo-AM and Rhod-2AM (Maokang Biotech, Shanghai, China) probes.

[2]

Mag-Fluo-AM and Rhod-2AM (Maokang Biotech, Shanghai, China) probes.  Mag-Fluo-AM monitors ER Ca2+ concentration, and Rhod-2AM indicated mitochondrial Ca2+ level. Cellular images were acquired by using the Operetta CLSTM High Content Analysis System (PerkinElmer, Massachusetts, USA) or an inverted fluorescence microscope (Nikon Eclipse Ti-SR, Tokyo, Japan).