BL21 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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产品标签：

BL21；pGEX；pMAL；BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；羧苄青霉素钠；卡那霉素；链霉素；

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产品组分：

菌株描述

BL21菌株是最先开发的原核表达用的大肠杆菌菌株，适用于转化和非T7载体的常规蛋白表达，主要用于非毒性蛋白的表达。该菌株不含T7 RNA聚合酶基因，因此，不可用于T7启动子驱动的蛋白表达（如pET系列表达载体）；但含大肠杆菌RNA聚合酶基因，可以用于tac或trc等利用大肠杆菌RNA聚合酶的原核标系统的表达（如pGEX，pMAL表达载体）。该菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶ompT的基因，这两种酶的缺失降低了外源重组蛋白在菌体内的降解，从而增加了蛋白表达量。对噬菌体T1（fhuA2）具有抗性。

BL21菌株基因型：E. coli B F-dcm ompT hsdS(rB-mB-) gal [malB+]K-12(λS)

产品描述

本品是大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内，置于冰浴中。【注意：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2）   向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

3）   42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4）   向每个离心管中加入450 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5）   5000rpm离心1min收菌，留取100μl上清轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若预计的克隆较多，可直接吸取转化产物涂布平板；若预计的克隆较少，则同上离心（5,000 rpm，1min）后留取适量培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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