目录号 | MF2362-1000UL | 售价 | 290.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 10×100μl | 运输温度 | 干冰运输 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | Y1HGold酵母感受态细胞 | 保存温度 | -80℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 3个月 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 化学感受态细胞 | 订购数量 |
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产品简介: Y1HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 温馨提示 见我司(懋康生物)整理的酵母双杂交(Yeast two-hybrid assay)产品专题。
产品关键词: GAL4-AbA酵母单杂交系统;Y1HGold;pAbAi;pGADT7;Ar Qual;X-α-Gal ;Aureobasidin A (AbA);金担子素;
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产品组分:
产品描述 酵母单杂交是在酵母双杂交的基础上发展起来,不同于双杂交用来研究蛋白-蛋白间的相互作用,单杂交主要用于研究蛋白和DNA的相互作用。
Y1HGold是Clontech GAL4-AbA酵母单杂交系统用的菌株,MATα型,能直接转化质粒进行文库筛选。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统需要两种质粒配套使用,分别为pAbAi和pGADT7。前者筛选标志为Ura,用于表达pBait-AbAi构建子(通过将bait-DNA 单拷贝或串联重复序列克隆到pAbAi载体所得);后者筛选标志为Leu,用于表达GAL4 AD与诱捕蛋白(prey)的融合蛋白。Y1HGold-GAL4酵母单杂交系统的工作原理在于:基因组整合有pBait-AbAi的酵母报告菌株,当诱捕蛋白(prey)结合到诱饵序列(bait-DNA),GAL4 AD会激活AUR1-C报告基因的表达,这一表达使得细胞能够在含筛选抗生素金担子素(Aureobasidin A,AbA)的培养基上生长。与传统的营养缺陷报告基因相比,AUR1-C(AbAr)在很低浓度(100-200 ng/ml)下即可以有效杀死非抗性克隆,大大降低背景克隆生长。这一优势也可降低酵母单杂交假阳性发生的概率。
本品为经特殊工艺制备的Y1HGold酵母菌化学感受态细胞,用pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。
基因型 MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1
保存与运输方法 保存:其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存,三个月有效。其他组分按照标签注明保存,一年有效。 运输:干冰运输。
注意事项 1) 最好在冰上融化感受态细胞。 2) 转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。 3) Y1HGold对高温敏感,最适生长温度为27-30℃,一旦高于31℃,生长速度和转化率都呈指数下降。 4) 菌落变粉红色并不是污染,而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天,将平板内的腺嘌呤消耗殆尽,那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而,某些菌株ADE2基因被破坏,腺嘌呤合成受阻。且ADE4,5,6,7,8基因均正常。由此,造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞的积累使得菌落变为粉红色。 5) 酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢,营养缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板于29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板于29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆;涂SD双缺平板于29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆;涂SD三缺或四缺平板于29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆; 6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法 1) 取100 µl冰上融化的Y1HGold化学感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA (95-100℃ 孵育5 min,快速冰浴。重复一次。)10 µl,PEG/LiAc 500µl,用枪吹打几次充分混匀,30℃水浴30 min(在15min时翻转6-8次混匀)。 2) 之后将管子放42℃水浴15 min(在7.5min时翻转6-8次混匀)。 3) 5000 rpm离心40s弃上清,用400 µl ddH2O重悬沉淀,离心30s弃上清。 4) 用50 µl ddH2O重悬,涂板,放入恒温培养箱29℃培养48-96 h。
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