| 目录号 | MF2337-5000UL | 售价 | 1696.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 50×100μl | 运输温度 | 干冰 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受态细胞 | 保存温度 | -80℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 6个月 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 化学感受态细胞 | 订购数量 |
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产品简介: BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
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产品组分：
菌株描述 BL21-CodonPlus菌株来源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特别适合在大肠杆菌内高水平表达异源蛋白。由于异源蛋白来源宿主大量存在的某些tRNA在大肠杆菌内很是稀少，因此，想在大肠杆菌内有效表达异源蛋白通常受到限制。外力驱动下的高水平表达异源蛋白会耗尽已有的稀有tRNA，导致翻译中止。BL21-CodonPlus菌株正是根据此缺陷而基因改造后的菌株，额外添加在大肠杆菌内最常见限制异源蛋白表达的几种tRNA的基因拷贝。这些tRNA的存在使得许多原来在传统BL21菌株内表达很弱的异源蛋白能够在BL21-CodonPlus菌株内大量表达。BL21-CodonPlus-RIPL补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子（AGA, AUA, CCC, CUA）对应的tRNA（argU, ileY, proL, leuW），显著提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-基因的异源蛋白在大肠杆菌内的表达。
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株染色体还整合了λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），可用于pET系列、pGEX、pMAL等载体的蛋白表达，同时具有四环素，氯霉素，链霉素和壮观霉素抗性。
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株基因型：F–ompT hsdS(rB–mB–)dcm+ TetRgal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]
产品描述 本品是大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件 保存：-80℃保存，六个月有效。 运输：干冰运输。
注意事项 1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。 2） 最好在冰上融化感受态细胞。 3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。 4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。 5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。 6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。 2） 42℃热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。 3） 向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 4） 低速离心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含氯霉素（34μg/ml）以及所选质粒筛选抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。 【注意】： a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。 b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。 c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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