目录号 | MF2337-1000UL | 售价 | 396.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 10×100μl | 运输温度 | 干冰 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受态细胞 | 保存温度 | -80℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 6个月 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 化学感受态细胞 | 订购数量 |
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产品简介: BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
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产品组分:
菌株描述 BL21-CodonPlus菌株来源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株,特别适合在大肠杆菌内高水平表达异源蛋白。由于异源蛋白来源宿主大量存在的某些tRNA在大肠杆菌内很是稀少,因此,想在大肠杆菌内有效表达异源蛋白通常受到限制。外力驱动下的高水平表达异源蛋白会耗尽已有的稀有tRNA,导致翻译中止。BL21-CodonPlus菌株正是根据此缺陷而基因改造后的菌株,额外添加在大肠杆菌内最常见限制异源蛋白表达的几种tRNA的基因拷贝。这些tRNA的存在使得许多原来在传统BL21菌株内表达很弱的异源蛋白能够在BL21-CodonPlus菌株内大量表达。BL21-CodonPlus-RIPL补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子(AGA, AUA, CCC, CUA)对应的tRNA(argU, ileY, proL, leuW),显著提高外源基因,尤其是富含AT-或GC-基因的异源蛋白在大肠杆菌内的表达。
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株染色体还整合了λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),可用于pET系列、pGEX、pMAL等载体的蛋白表达,同时具有四环素,氯霉素,链霉素和壮观霉素抗性。
BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株基因型:F–ompT hsdS(rB–mB–)dcm+ TetRgal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]
产品描述 本品是大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件 保存:-80℃保存,六个月有效。 运输:干冰运输。
注意事项 1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。 2) 最好在冰上融化感受态细胞。 3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。 4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。 5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。 6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。 2) 42℃热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。 3) 向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。 4) 低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含氯霉素(34μg/ml)以及所选质粒筛选抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。 【注意】: a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。 b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。 c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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