5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)(DTNB)

5,5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）

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DTNB，Ellman’s Reagent，Sulfhydryl reagent 巯基试剂，巯基定量， CAS：69-78-3；

产品信息

产品描述

5,5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)），常称为DTNB或Ellman’s Reagent，与巯基反应生成一有色产物，提供一种可靠的方法来测定溶液内的还原性半胱氨酸和其他游离巯基。

DTNB具有以下特征：1）巯基测定：与游离（还原）巯基定量反应生成可测的TNB产物；2）生色测定：生色产物使其能在比色皿或酶标板内进行分光光度法测定（(λmax = 412nm; ε = 14,150 M-1cm-1)）；3）方法可靠：结构确定的化合物能够定量多肽或蛋白巯基，通过摩尔吸光系数计算或与半胱氨酸标准品比较计算。

DTNB与游离巯基反应生成一混合的二硫化物和2-硝基-5-硫代苯甲酸（TNB），此反应中DTNB的反应目标是连接游离巯基内的R-S-（反应流程见下图），整个反应程度依赖于几个因素：1）反应pH；2）巯基的pKa；3）空间和静电效应。TNB是显色的，在可见光区域内具高摩尔吸光系数。最早Ellman（1959）年报道的摩尔吸光系数是13,600M-1cm-1（412nm，pH 8.0），这一结果也被文献频繁引用。但最后研究显示，更精确的摩尔吸光系数是14,150M-1cm-1（412 nm），在pH 7.6~8.6范围内摩尔吸光系数没有变化。但这一数值在其他溶剂内会不同（见附录I）。

产品特性

1）   CAS NO：69-78-3

2）   英文同义名：DTNB; Ellman's Reagent; 5,5′-Dithio-bis-(2-nitrobenzoic Acid); 3-Carboxy-4-nitrophenyl disulfide; 6,6′-Dinitro-3,3′-dithiodibenzoic acid; Bis(3-carboxy-4-nitrophenyl) disulfide;

3）   中文同义名：5,5′-二巯基(2-硝基苯甲酸)；6,6′-二硝基-3,3′-二硫代苯甲酸；双(3-羧基-4-硝基苯基)二硫；Ellman试剂；

4）   分子式：C14H8N2O8S2

5）   分子量：396.35

6）   反应指向：巯基（-SH）

7）   纯度：≥98%

8）   外观：浅黄色至黄色结晶性粉末

9） 溶解性：溶于无水乙醇，二氧六环，磷酸缓冲液

10） 化学结构图：

保存与运输方法

保存：室温干燥保存，长期不用置于2-8℃干燥保存，至少2年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）   DTNB对各种缓冲离子敏感，因此，用来计算巯基数量的摩尔吸光系数必须与反应体系一致（见附录II）。

2）   DTNB室温保存稳定。有报道显示将DTNB室温保存3.5年后，仍然适用于巯基定量，TLC测定显示纯度基本未发生变化。

3）   DTNB能溶于乙醇（8mg/ml），也能溶于含0.1mM EDTA的100mM磷酸钠或磷酸钾缓冲液，pH 7.2制备成5mM溶液，此溶液于4℃避光保存约2个月稳定。

4）   DTNB的稳定性随氢氧化物浓度提高而降低。有研究报道室温水溶液，pH 7.0下每小时降解0.02%，pH 8.0下每小时降解0.2%。其他研究报道，室温在100mM磷酸缓冲液下，pH 7.0下保存7周无损失，pH 8.0下保存48h损失5%，pH 9.3下保存4h损失9%，pH 12.0下保存15min完全降解。

5）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录I

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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