苏木素伊红（HE）染色试剂盒

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产品信息

产品描述

苏木素（Hematoxylin），也称作苏木精，苏木色精，无色的苏木素经氧化后形成有醌环结构的氧化苏木素（Hematein），同媒染剂（常用的是三价铝或铁盐）一起使用，形成有颜色的带正电荷的复合物（如Hematein-Al3+complexes），从而使细胞核着色。着色原理在于细胞核内染色质主要成分是DNA，DNA双螺旋结构中双链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物以离子键或氢键结合而被染色。苏木素染色液因配方的不同，将细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。

伊红（Eosin Y）是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下能使细胞浆着色。着色原理在于细胞浆的主要成分是蛋白质，是一种两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值有密切关系。当染色液pH在胞浆蛋白质等电点以下，蛋白质以碱式电离呈正电荷，此时可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中解离成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白上带正电荷的阳离子结合，使得胞浆着色。根据染色液配方的不同，将细胞浆染色成不同程度的红色或粉红色。

本苏木素伊红（HE）染色试剂盒（Hematoxylin-Eosin (HE) Stain Kit）综合了多种经典的HE染色法，例如Harris法、Mayer法等，简化了操作步骤，缩短了操作时间，并且染色液内不含氧化汞、甲醇等有毒试剂。适用于组织石蜡切片、冰冻切片或培养细胞的染色等。苏木素染色液可重复使用，直至认为效果不佳，再更换新的染色液。

产品组成

保存与运输方法

保存：室温保存，1年有效。

运输：室温运输。

注意事项

1）   切片脱蜡应尽量干净；

2）   梯度浓度乙醇应经常更换新液；

3）   盐酸乙醇分化虽为选做步骤，但分化后的核质着色更清晰。盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另，分化后自来水冲洗时间应足够，以保证彻底清洗掉酸。

4）   冷冻切片染色时间尽量要短。

5）   第一次使用本试剂盒建议先取1~2个样品做预实验。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

一、   需要自行准备的材料

1）   盐酸乙醇分化液

2）   蓝化液，比如0.2~1%稀氨水、0.1~1%碳酸锂溶液、Scott促蓝液等

3）   梯度浓度乙醇

4）   4%多聚甲醛（比如：MM1504-500ML）

5）   中性树胶封片剂（比如：MM1503-100ML）

二、   染色流程（石蜡切片）

2.1 样品处理

1）二甲苯脱蜡2次，每次5~10min；

2）（可选）无水乙醇作用2次，每次3~5min；

3）95%乙醇1次，3~5min；

4）90%乙醇1次，3~5min；

5）80%乙醇1次，3~5min；

6）自来水或蒸馏水冲洗1次，1~3min；

2.2 染色步骤

1）苏木素染色液染色5~8min；

2）自来水或蒸馏水冲洗5~10s；

3）（可选）盐酸乙醇分化2~5s；

4）自来水冲洗20~30s；

5）蓝化液返蓝20~40s；

6）自来水冲洗30~60s；

7）伊红染色液染色3~5min；

8）自来水冲洗1~5s；

2.3 脱水、透明、封固

1）80%乙醇1次，10~20s；

2）90%乙醇1次，10~20s；

3）95%乙醇2次，每次1~2min；

4）无水乙醇2次，每次2~3min；

5）二甲苯透明3次，每次2~3min；

6）中性树胶封片。

2.4 染色结果

细胞核呈蓝色；

细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；

角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

三、染色流程（冰冻切片）

3.1 染色步骤

1）乙醚-乙醇混合固定液固定5~10s；【注意】：乙醚-乙醇混合固定液由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，混合均匀后，需密封保存。

2）自来水冲洗2~5s；

3）苏木素染色液染色1~2min（可加热至50℃）；

4）自来水冲洗2~5s；

5）（可选）盐酸乙醇分化2~5s；

6）自来水冲洗2~5s；

7）蓝化液返蓝2~5s；

8）自来水冲洗5~10s；

9）伊红染色液染色2~5s；

10）自来水冲洗1~2s；

11）80%乙醇1次，1~2s；

12）95%乙醇1次，1~2s；

13）无水乙醇1次，2~5s；

14）苯酚：二甲苯（1：3）2~5s；

15）二甲苯透明3次，每次2~5s；

16）中性树胶封片。

3.2 染色结果

细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

四、染色流程（培养细胞）

4.1 染色步骤

1）4%多聚甲醛固定10~20min；

2）自来水冲洗2次，每次2min；

3）蒸馏水冲洗2次，每次2min；

4）染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色方法，作用时间应相应缩短。

4.2 染色结果

细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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