10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP) 过氧化氢探针

（Amplex^® Red H₂O₂ probe 过氧化氢探针）

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搜索关键词：

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)；Amplex®Red； Resorufin 试卤灵；过氧化氢探针；Ampliflu™ Red；CAS NO：119171-73-2；

基本介绍：

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪，以商标名Amplex®Red在市场上销售。ADHP是一种高度灵敏和稳定的过氧化物酶底物，选择性检测过氧化氢（H2O2）。存在辣根过氧化物酶（HRP）的体系中，这一基本无色和非荧光的ADHP与H2O2以1：1的化学定量比反应，生成强红色荧光的试卤灵（Resorufin）（Ex/Em= 571/585nm），可通过荧光光度计和酶标仪分析结果。许多酶反应能产生H2O2，因此，ADHP能够用在偶联酶促反应中检测许多不同酶的生物活性。

工作原理：

Fig 1. 使用ADHP进行偶联酶促反应的工作原理。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成过氧化氢（H2O2），通过辣根过氧化物酶（HRP）催化ADHP反应生成强荧光试卤灵（Resorufin）。

产品应用：

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)是目前位置最灵敏和稳定的荧光探针用来检测HRP和H2O2。

A）  ADHP普遍用来检测许多免疫实验中的HRP；

B）  ADHP用来检测微量的H2O2；

Zhou, M.等研究表明ADHP（Amplex®Red）检测过氧化物酶活性，最少能检测1×10−5U/mL HRP；或H2O2，最少能检测50nM H2O2。【文献来源：Zhou M et al. A stable nonfluorescent derivative of resorufin for the fluorometric determination of trace hydrogen peroxide: applications in detecting the activity of phagocyte NADPH oxidase and other oxidases. Anal Biochem. 1997 Nov 15;253(2):162-8.】

基本特性：

1）   CAS NO.：119171-73-2

2）   化学名：1-(3,7-dihydroxy-10H-phenoxazin-10-yl)-ethanone; 10H-Phenoxazine-3,7-diol, 10-acetyl-;

3）   同义名：N-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine N-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪；ADHP；Amplex®Red Reagent；A 6550；Ampliflu™ Red 荧光红染料；

4）   分子式：C14H11NO4

5）   分子量：257.25

6）   纯度：≥98%

7）   摩尔消光系数（ε）：54,000 (Resorufin)

8）   Ex/Em：571/585nm (pH 9.0, Resorufin)

9）   溶解性：溶于DMSO、DMF

10）  化学结构式： 

ADHP的应用实例：

文献来源：Summers FA et al. Photooxidation of Amplex Red to resorufin: implications of exposing the Amplex Red assay to light. Methods Enzymol. 2013;526:1-17.

实验1）Amplex Red Assay

Reactions containing 50 µM Amplex Red reagent, 0.1 U/mL HRP, H2O2 and 0.5 U/mL catalase in 50 mM sodium phosphate buffer, pH 7.4, as indicated in the figure legends, were prepared in a darkroom under a red light. White ELISA plates containing the samples (100 µL/well) in triplicate were either kept in the dark for 30 and 60 min or under ambient laboratory light. The fluorescence (excitation 535 nm, emission 595 nm) was measured on a GENios platereader (Tecan, Durham, NC, USA).

实验2）Cell Culture Assay

HaCaT keratinocytes were incubated with 50 µM Amplex Red in PBS for 1 h at 37°C in the dark, then cells were irradiated using UVA (315–400 nm) from four fluorescent PUVA lamps (Houvalite F20T12BL-HO; National Biological Co., Twinsburg, OH) for 15 minutes (3.75 J/cm2) and 30 minutes (7.5 J/cm2). Control cells were treated with the same conditions. After exposure, the fluorescence (excitation 535 nm, emission 595 nm) was recorded using a plate reader.

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注意事项

1）   ADHP的使用比较方便，可配制10-20mM DMSO储存液，之后用反应缓冲液比如PBS，Tris buffer稀释到50-200µM工作浓度用于检测。最佳的工作浓度需根据自身实验需求进行优化。

2）   Amplex®Red是Life Technologies公司的注册商标名。

3）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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