目录号 | MF0752-500UL | 售价 | 2950.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 500µl | 运输温度 | 冰袋 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | SYBR Green II RNA凝胶染料 | 保存温度 | -20°C避光干燥保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | RNA凝胶染料 | 订购数量 |
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产品简介: SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝胶染料
产品标签 SYBR Green II;GoldView;Acridine Orange 吖啶橙;GelRed; GelGreen;溴化乙锭(EB);SYBR Green I;
产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格(元)
SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝胶染料
MF0752-100UL
100µl
780
SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝胶染料
MF0752-500UL
500µl
2950
SYBR Green II是目前已知电泳凝胶中RNA检测最灵敏的染料之一,在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶中最低检到100pg RNA或ssDNA的单一条带(使用254nm紫外反射光源照射,并用宝丽来667黑白胶片和SYBR滤光片拍照)。即使用300nm透射光也能检测到500pg RNA的单一条带。SYBR Green II的灵敏度明显强于溴化乙啶(EB)。标准琼脂糖迷你胶EB最低检出1.5ng单链核酸的单一条带(使用300nm透射光照射并用橙-红明胶滤光片拍照)。
SYBR Green II在变性琼脂糖/甲醛凝胶和聚丙烯酰胺/尿素凝胶中的检测灵敏度有点降低,然而仍优于EB。为了获得最大的检测灵敏度,琼脂糖/甲醛凝胶必须在EB染色前清洗数小时。相反,不做任何的清洗或脱色步骤,用SYBR Green II染色的琼脂糖/甲醛凝胶或聚丙烯酰胺/尿素凝胶能检测到1ng RNA单一条带(254nm反射照明)和4ng RNA单一条带(300nm透射照明)。SYBR Green II在RNA检测具备这一卓越灵敏度的特性归因于几个因素,包括优越的荧光量子产量、结合能力和荧光增强。
本品为溶于DMSO 的10,000×的SYBR Green II RNA核酸染料,可用于:1)Northern Blot、起始位点作图或cDNA制备前对RNA产物的小量分析;2)高分辨率变性梯度凝胶电泳(DGGE)后对5S rRNA迁移方式的观察;3)单链构象多态性(SSCP)中的DNA染色;4)PCR扩增前对DNA染色。
保存与运输方法 保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。 运输:冰袋运输。
注意事项 1) 必须警告用户注意,目前尚无关于SYBR Green II 对人体的致突变性或毒性的数据。由于该染料与核酸结合,应当被看作潜在诱变剂,使用时要小心谨慎。在处理DMSO储存液时应特别小心,因DMSO能促进有机分子进入组织。强烈建议处理DMO储存液需戴双层手套。和所有的核酸染料一样,含SYBR Green II RNA核酸染料的溶液需先穿过活性炭再丢弃。活性炭之后必须焚烧来破坏染料。 2) SYBR Green II可通过乙醇沉淀法从核酸中去除。异丙醇沉淀法去除效果稍差些。正丁醇萃取、氯仿萃取和酚萃取法无法有效去除该染料。 3) 先用EB染色的凝胶可接下来用SYBR Green II染色,根据电泳后染色(post-staining)的标准步骤操作。与直接用SYBR Green II染色相比较可能灵敏度有些降低。 4) 不要在玻璃器皿中稀释SYBR Green II储存液,因其会结合到玻璃上。在聚丙烯器皿中稀释储存液。 5) SYBR Green II不会干扰酶反应。 6) 当用SYBR Green II染Northern或Southern Blot凝胶,建议在预杂交液和杂交液内加入0.1%-0.3% SDS。 7) 不建议用254nm紫外透射仪对凝胶拍照,因紫外光源的轮廓会出现在照片上。需要使用允许525nm光透过且排斥其他波长光的滤光片。 8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
光谱特征 SYBR Green II RNA核酸染料可用常见的紫外反射和透射激发光源,以及手持式紫外灯检测。SYBR Green II的最大激发波长为497nm,但还有一个二级激发峰集中在254nm附近。与RNA结合的SYBR Green II的荧光发射集中在520nm。这些光谱特性让SYBR Green II适用于多种凝胶检测仪,从紫外反射(上紫外)和透射仪(下紫外)到氩离子激光器和水银灯激发的凝胶扫描仪。
使用方法 一、使用前准备工作 使用前将本品取出并回温至室温,使DMSO彻底解冻、溶液均一。于离心机上短暂离心确保所有溶液到管底。第一次使用时可将本品分装成多个小份后冻存,小份染料能更快溶解。
二、染色方法 1.电泳后染色(后染,推荐) 1)在非变性凝胶或变性聚丙烯酰胺/尿素或琼脂/甲醛凝胶上进行电泳。 【注】:其他凝胶基质未做测试,不确定染色效果如何。 2)稀释SYBR Green II储存液:对于非变性凝胶和变性聚丙烯酰胺/尿素凝胶,建议用TBE做1:10,000倍 稀释;对于变性琼脂糖/甲醛凝胶,建议用TBE做1:5,000倍稀释。 【注】:SYBR Green II染色对pH敏感,为获得最佳的灵敏度,应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5- 8.0之间(pH8.0更佳)。 3)将凝胶小心的放入合适的容器中,比如聚丙烯容器。缓慢加入足量的SYBR Green II染色工作液浸没凝胶。用铝箔等盖住容器或将容器置于黑暗处使得染料避光。染色前没有必要洗掉凝胶上的尿素或甲醛。 4)室温轻摇凝胶。聚丙烯酰胺凝胶的最佳染色时间通常为10-40min,琼脂糖凝胶的通常为20-40min。凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同,染色时间将有所不同。不需要脱色。染色液需保存在暗处(最好是冷藏)和重复使用3-4次。 【注】:用缓冲液制备的染色液置于4℃避光能放置1周或更久,置于室温避光能放3-4天。用水制备的染色液比缓冲液制备的稳定性差很多,建议24h内用完保证最大灵敏度。另外,用缓冲液(pH>8.0或pH<7.5)的缓冲液制备的染色液稳定性差很多,染色效率也会降低。
2.电泳前染色(预染) 1)配制成SYBR Green II预制凝胶 临灌胶前,按照每100ml凝胶中加入3-5µl SYBR Green II储存液(10,000× in DMSO)的比例加量。需注意到SYBR Green II热稳定性较差,不能在过热胶溶液中直接添加,需要等溶液冷却至50℃左右才能加染料。摇晃,震荡或翻转以保证染料充分混匀。 2)按照常规方法进行电泳。
三、观察和凝胶成像 3.1 使用300nm紫外透射光或254nm紫外反射光(灵敏度更高)照射染色凝胶。 3.2 为了最佳灵敏度,建议使用黑白胶片,可用专用的SYBR Green照相滤光片(Thermo fisher, #S7569)拍照。许多其他的黄色或绿色明胶或玻璃纸滤光片也能用来拍照,但绝大多数可能会减低灵敏度。EB染色凝胶拍照用的橙-红滤光片不适合于SYBR Green II染色凝胶。 3.3 用专用的SYBR Green照相滤光片(Thermo fisher, #S-7569)和Polaroid 667黑白胶片对凝胶进行拍照。染色凝胶基本无背景荧光,当检测少量RNA,允许长期胶片曝光。对于300nm透射,通常F-stop设置4.5时曝光1-2s足够。对于254nm反射(特别是手持灯),大约需要曝光1-1.5min以得到最大灵敏度。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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