目录号 | MX4606-1MG | 售价 | 1028.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 2×500μg | 运输温度 | 冰袋运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; 腔肠素游离酸; | 保存温度 | -20ºC避光干燥保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | 55779-48-1 | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 活细胞或组织的钙离子检测;报告基因检测; | 订购数量 |
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产品简介: Coelenterazine Native 天然腔肠素
产品信息
【温馨提示】:见我司懋康生物(maokangbio)提供的活体成像底物-腔肠素及衍生物产品专题。
产品描述 腔肠素(Coelenterazine)是在水生生物中发现的一种发光基团(luminophore),是许多荧光素酶的作用底物,包括海肾荧光素酶(Renilla reniformis luciferase, Rluc),分泌型膜锚定荧光素酶(Gaussia luciferase, Gluc)和薮枝虫荧光素酶(Obelia luciferase),和发光蛋白包括水母发光蛋白(Aequorin)的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶,在含分子氧的条件下,氧化腔肠素产生高能量的中间产物,在此过程发射蓝色光,光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶(FLuc)系统不同,其在含分子氧的条件下,还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光,光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异,RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究,或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛,包括:1)活细胞或组织的钙离子检测;2)细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子(活性氧,ROS)化学发光检测;3)基因报告基因检测;4)动物活体检测;5)ELISA和生物发光共振能量转移(BRET)用于蛋白相互作用研究;6)药物高通量筛选(HTS);
图1. 海肾荧光素酶(Rluc)催腔肠素发光的反应流程 天然腔肠素(Coelenterazine Native)是自然界中存在最丰富的一种腔肠素,也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是天然水母发光蛋白复合物的发光基团,也是海肾荧光素酶(Rluc)和分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)等的作用底物。还可用于生物共振能量转移BRET,细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平(ROS)的化学发光检测。
产品特性 1) CAS NO:55779-48-1 2) 化学名:8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one 3) 同义名:Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; 腔肠素游离酸; 4) 分子式:C26H21N3O3 5) 分子量:423.46 g/mol 6) 纯度:>95% 7) 外观:黄色至棕黄色结晶性粉末 8) 溶解性:溶于甲醇或乙醇,不要溶于DMSO 9) 化学结构式:
保存与运输方法 保存:-20℃干燥避光保存,且保存于惰性气体内。至少一年有效。 运输:冰袋运输。
注意事项 1) 腔肠素(Coelenterazine, CTZ)最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内,密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气,也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。由此,不同组间的定量结果可能显得不可靠,数据可比性不高。 2) 腔肠素(Coelenterazine, CTZ)不建议以储存液的形式保存,最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素溶液储存在-20℃或-70℃,因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构,即使在低温条件下都会自发降解。若是必须配成液体储存液,请按照操作步骤一、腔肠素工作液制备执行。 3) 体内动物实验,推荐使用我司(懋康生物)特别开发和优化的注射用天然腔肠素(Injectable native Coelenterazine)(#MX4607-1MG)或注射用腔肠素h(Injectable h-Coelenterazine)(#MX4609-1MG)。 4) 商业化腔肠素的种类繁多,有天然腔肠素,以及各种腔肠素衍生物(比如,腔肠素h,腔肠素400a,腔肠素e,腔肠素f,腔肠素hcp)。它们对钙离子的亲和力,光谱特性,以及应用倾向上会有差异,详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性,附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。 5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤 一、 腔肠素工作液制备 【有关腔肠素溶解的注意事项】: 1) 腔肠素溶于甲醇或乙醇,不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低,一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液,然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作液,现配现用。 2) 腔肠素在溶液中的稳定性比较低,最好于正式实验前才配制溶液(包括高浓度母液)。但若实际要求,必须保存母液,目前来说最稳定的溶剂是丙二醇,往内加入少量L-抗坏血酸,β-巯基乙醇,DTT,DTE,或少量HCl能维持其还原态。不过,还原剂可能会减低氧化腔肠素(氧化为Coelenteramide)的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀,实际取决于溶液浓度。当然,可通过加热50-60℃,使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀,或在实验前(特别是活体动物)离心去沉淀。
1.1 腔肠素母液制备 将低温保存的腔肠素粉末置于室温回温至少20min,低速离心后。往500µg天然腔肠素内加入98µl 酸化的甲醇溶液(100%甲醇中含有20µl/ml 3M或者6M HCl),配制成12mM(~5mg/ml)腔肠素母液。≤-20℃(最好-80℃)分装避光保存,可能会有少量活性的丧失,约保存4周。若存放在惰性气体内科延长保存周期。
1.2 腔肠素工作液制备 直接用去气蒸馏水(degased distilled water),PBS或者其他类型生理缓冲液稀释。现配现用。可直接用不含Ca2+/Ma2+的PBS将12 mM的储存液稀释到2mM(~1 mg/ml)的工作液,+4°C避光短暂存放。若是体外实验,需要使用前回至室温。
附录1 天然腔肠素及其衍生物的光谱特性
附录2天然腔肠素及其衍生物的应用差异
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