BL21-AI Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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产品标签：

BL21 Star (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；BL21 (DE3)；表达感受态细胞；pET表达载体；IPTG诱导；非毒性蛋白表达；

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产品组分：

菌株描述

BL21-AI菌株来源于BL21菌株，是一种大肠杆菌B/r菌株（E. Coli B/r）。含有一个染色体整合的编码T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的基因到araBAD操纵子的araB位点，通过操控araBAD启动子来调节T7 RNA聚合酶的表达。此菌株已经敲除araB基因。tetA基因赋予四环素抗性，允许用四环素来验证菌株。

由于T7 RNAP基因位于araBAD操纵子的araB位点，因此，可通过糖类（L-阿拉伯糖和葡萄糖）来调节T7 RNA聚合酶的表达。在培养基内加入L-阿拉伯糖，能够诱导araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达，进而促进目的蛋白表达；而在培养基加入葡萄糖，能够抑制araBAD启动子下游T7 RNA聚合酶表达，进而抑制目的蛋白表达。BL21-AI菌株适用于任何以T7启动子为基础的表达载体，进行高水平的重组蛋白表达。由于T7 RNA聚合酶的表达水平能被高度调控，该菌株特别适用于表达对其他BL21菌株有毒或抑制生长的蛋白。

BL21-AI菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶OmpT的基因，这两种酶的缺失能够降低外源重组蛋白在菌体内的降解，从而增加了蛋白表达量。最终，BL21-AI菌株表达所得的重组蛋白产量与其他BL21菌株相近。

BL21-AI菌株基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

需求条件

建议在以下几个情况下选择BL21-AI菌株来表达您的目的基因：

a）   正在使用T7启动子为基础的表达载体（高拷贝或低拷贝皆可）

b）   当使用其他BL21菌株发现生长抑制现象（比如毒性）

c）   正要表达一种已知的毒性蛋白

产品描述

本品是大肠杆菌BL21-AI菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热激转化。特别适合任何以T7启动子为基础的表达载体系统，且要求严格调控和大量表达毒性蛋白的应用。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）  从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。

2）   42℃热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3）   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4）   低速离心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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