目录号 | MF2333-1000UL | 售价 | 280.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
规格 | 10×100μl | 运输温度 | 干冰 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名称 | Rosetta (DE3) Chemically Competent Cell 化学感受态细胞 | 保存温度 | -80℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | N/A | 有效期 | 6个月 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
应用 | 大肠杆菌表达感受态细胞 | 订购数量 |
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产品简介: Rosetta (DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
产品标签: BL21 (DE3);Rosetta (DE3);Rosetta (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;
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产品组分:
菌株描述 Rosetta宿主菌是BL21衍生菌,特别设计用于提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达水平,这些菌株补充6种大肠杆菌缺乏的稀有密码子(AGG, AGA, AUA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,位于兼容的氯霉素抗性质粒上,正因如此,Rosetta菌株提供“通用型”的翻译特征,而不限于大肠杆菌可利用的密码子。tRNA基因由天然启动子所启动。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。 Rosetta (DE3)菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pRARE(CamR)
产品描述 本品是大肠杆菌Rosetta (DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件: 保存:-80℃保存,六个月有效。 运输:干冰运输。
注意事项 1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。 2) 最好在冰上融化感受态细胞。 3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。 4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。 5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(0.1ng/μl),供对照实验用。 6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】 1) 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内,置于冰浴中。【注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】 以下实验以50 μl感受态细胞为例。 2) 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴静置30min。 3) 42℃热击45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。 4) 向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,150 rpm振荡培养45min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。 5) 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。 【注意】: a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。 b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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