0.4% Trypan Blue Solution 0.4%台盼蓝染色液

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产品标签

Trypan Blue 台盼蓝；曲利苯蓝；死细胞着色法；染料排斥法；活细胞着色法；亚甲基蓝；CAS：72-57-1；

产品信息 ：即日起，只要买台盼蓝染色液（≥100ml）一瓶，即赠送血球计数板一个【仅限终端】。

产品描述

台盼蓝（Trypan Blue，CAS NO. 72-57-1）是一种蓝色酸性染料，含有两个偶氮发色团。是一种较大、亲水和四磺酸化的阴离子染料，普遍用于检测细胞膜的完整性以及评估细胞的存活率。作为一种鉴定细胞存活的简易方法，台盼蓝渗透进入丧失活性或细胞膜不完整的细胞将其染成蓝色（通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡），而具有完整细胞膜的活细胞将染料排斥在外。因此，通过颜色的差异能肉眼直接区分死细胞和活细胞。

本品是0.4%台盼蓝染色液，使用方便，只需经简单的染色，即可通过光学显微镜直接计数来鉴定细胞的存活情况。

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   台盼蓝具有轻微的细胞毒性，操作过程中请注意防护，避免与身体的直接接触。

2）   凋亡小体偶尔也有台盼蓝拒染现象。

3）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）  细胞收集

对于悬浮细胞：离心收集细胞，充分清洗后，用适当缓冲液如PBS、HBSS重悬，制备成单细胞悬液。若有需要，可做适当稀释。

对于贴壁细胞：先用胰酶消化细胞，之后离心收集细胞，经充分清洗后，再用适当缓冲液重悬，制备成单细胞悬液。若有需要，可做适当稀释。

2）  台盼蓝染色

将细胞悬液与0.4%台盼蓝染色液按照9：1的比例稀释，轻轻混匀后，室温染色3min。【注意】：一般情况染色3min足矣。某些情况可延长染色时间，但不宜超过10min。

3）  细胞计数

吸取少量染色细胞到血球计数板内，于普通光镜10×物镜下计数四个大格内的细胞数，压线者数上不数下，数左不数右，分别记录着色细胞（包括损伤细胞和死细胞）和未着色细胞（活细胞）。

【注意】：用移液枪加样，沿着盖玻片的边缘轻轻加液使其完全覆盖住整个小室。不宜过量或量太少。

【注意】：1mm2方格内细胞数目通常控制在20-50个。当细胞数目超过200个，需重新调整稀释倍数。

4）  结果分析

按照以下公式来计算细胞数目和活细胞百分比，

i）计算每ml细胞数目：细胞数 /ml= 1mm2大方格内的平均细胞数×稀释倍数×104；

【注意】：此处的稀释倍数即为步骤2）内的单细胞悬液与台盼蓝染色液混合后的稀释倍数。

ii）总细胞数目：细胞总数 = (细胞数/ml) × 最初制备单细胞悬液的总体积

iii）细胞存活率（活细胞率）：活细胞率（%）=（总细胞数目-总着色细胞数）/总细胞数 × 100

【注意】：处于健康的对数生长期细胞，通常情况活细胞至少占到95%。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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