7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid, succinimidyl ester 

7-羟基香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯

产品信息

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产品描述

7-羟基香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯（7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid, succinimidyl ester）是7-羟基香豆素-3-羧酸（7-OHCCA）的胺反应琥珀酰亚胺酯，是用来标记蛋白和核酸的一种蓝色荧光染料。这一香豆素的衍生物也越来越多的被用来标记多肽、核苷酸和碳水化合物。

产品特性

1）   CAS NO：134471-24-2

2）  英文同义名：7-OHCCA SE; 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic Acid N-Succinimidyl Ester; N-Succinimidyl 7- Hydroxycoumarin-3-carboxylate; Umbelliferone-3-carboxylic acid N-succinimidyl ester; N-Succinimidyl Umbelliferone-3- carboxylate;

3）   中文同义名：7-羟基香豆素-3-羧酸-N-琥珀酰亚胺酯；N-琥珀酰亚胺基-7-羟基香豆素-3-羧酸酯；伞形酮-3-羧酸-N-琥珀先亚胺酯；N-琥珀酰亚胺基-伞形酮-3-羧酸酯；

4）   分子式：C14H9NO7

5）   分子量：303.22

6）   含量：≥95% (HPLC)

7）   Ex/Em：386/448nm (in 0.1M Tris, pH 9.0)

8）   外观：类白色至白色粉末

9）   溶解性：溶于DMSO，DMF

10）化学结构：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少1年有效。

运输：常温运输。

注意事项

1）   荧光探针都存在淬灭的现象，在保存和使用的过程中都要注意避光。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

琥珀酰亚胺酯标记氨基生物分子（NHS ester labeling of amino biomolecules）

琥珀酰亚胺酯（NHS酯）（NHS ester）是一种常用的活化酯，适合用于修饰和标记存在于蛋白、多肽、氨基生物分子和DNA中的氨基。NHS酯与胺的反应具pH依赖性。低pH环境，氨基基团质子化，标记无法发生。而高于优化条件的pH环境，NHS酯快速水解，导致标记产量低。用来标记的最佳pH范围是8.3-8.5。

水是标记反应的最常用溶剂。如果NHS酯水溶性弱，可先溶于DMSO或DMF，再加入蛋白水溶液。DMF必须不含有胺类，从而应该是无臭的。

以下是NHS酯标记氨基生物分子的通用步骤，仅作参考。

1.       计算NHS酯的所需量；

2.       确定反应体系的体积；

3.       用DMSO或DMF溶解NHS酯。

【注意：低温保存的NHS酯一定要提前取出回至室温，低速离心后，再开盖使用。NHS酯固体一定要用高质量的无水有机溶剂溶解，配制成合适浓度母液，尽量现配现用，或根据单次用量分装，置于-20℃干燥冻存，避免反复冻融。】

4.       用pH 8.3-8.5的缓冲液溶解生物分子。

I）可用0.1M NaHCO₃或0.1M 磷酸缓冲液。注意pH是最重要的事。且避免缓冲液内含胺类物质，比如Tris，甘氨酸，铵离子，或稳定蛋白比如BSA。如果缓冲液内含胺类物质，可先透析到10-20mM PBS。然后按照1ml生物分子溶液加0.1ml 1M NaHCO₃得到理想的pH。低浓度叠氮钠（<3 mM）或柳柳汞（<1 mM）不会干扰标记反应。

II）当进入大规模标记（几百mg级别的NHS酯），注意由于NHS酯的水解随着时间推移，反应混合物容易发生酸化。监测pH，或之后使用更高浓度的缓冲液。

5.       加NHS酯溶液到生物分子溶液内，轻轻涡旋混匀。冰上过夜或室温至少标记4h。

6.       使用合适方法比如凝胶过滤（大分子最常用方法）来纯化标记物。沉淀和色谱是其他可选的替代方法。有机杂质（比如N-羟基琥珀酰亚胺，NHS酯，水解过程产生的酸）绝大部分都很容易被分离。对于蛋白和核酸，可用乙醇或丙酮沉淀法。

7.       纯化好的标记分子最好保存于未标记分子的相同溶剂中。为了防止标记分子变性，或延长保存周期，可添加BSA或其他稳定剂。

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