Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔肠素

产品关键词：

Coelenterazine (CTZ) 腔肠素；CTZ-Native 天然腔肠素；海肾荧光素酶（Rluc）；分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）；萤火虫荧光素酶（Fluc）；In vivo bioluminescence imaging 活体动物体内成像技术；CAS NO：55779-48-1；

产品信息

【温馨提示】：见我司懋康生物（maokangbio）提供的活体成像底物-腔肠素及衍生物产品专题。

产品描述

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelia luciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；

图1. 海肾荧光素酶（Rluc）催腔肠素发光的反应流程

天然腔肠素（Coelenterazine Native）是自然界中存在最丰富的一种腔肠素，也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是天然水母发光蛋白复合物的发光基团，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等的作用底物。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测。

本品为专供体内成像研究的注射用天然腔肠素（Injectable native Coelenterazine），不仅含有超纯的天然腔肠素（＞99%），还提供特别设计的Inject-Diluent溶剂，能够最大程度的溶解腔肠素，从而最小化体内注射体积。另外，与传统乙醇溶解的腔肠素相比，用Inject-Diluent溶解的腔肠素能得到更好的荧光信号。

产品组分

保存与运输方法

保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   本品特别开发适用于体内实验。若仅做体外实验，可使用我司提供的天然腔肠素（Coelenterazine Native）（#MX4606-1MG）或腔肠素h（Coelenterazine h）（#MX4608-1MG）。

2）   商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

3）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤

1．   使用装有23 gauge或更小针头的0.5-1.0ml注射器，吸取150μl 温热（35-50℃）的Inject-Diluent。

2．  将150μl Inject-Diluent打入Native Coelenterazine瓶内，使用针头和注射器上下吸打或低速涡旋，直至看到完全透明溶液，此时得到腔肠素溶液浓度为3.33mg/ml。如果溶液没有完全透明，用水浴锅或加热板在60-80℃加热几分钟，检查完全透明。

3．   按下表1，用胰岛素注射器吸取15-75μl充分溶解的腔肠素溶液（3.33mg/ml），通过尾静脉注射到动物体内。检查，排气，冲洗针头。使用胰岛素注射器的优势在于很低的液体滞留体积（＜2μl）。缓慢注射。

建议按照表1单只小鼠（25g体重）的腔肠素溶液（3.33mg/ml）注射剂量表

【注意：分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）比其他荧光素酶强许多倍，具有更高的Km值，因此需要更多的腔肠素底物来达到理想的信号值。天然腔肠素是唯一的底物能用于分泌型膜锚定荧光素酶。建议每只25g体重的小鼠，使用100-200μg腔肠素。往每只25g小鼠内注射的液体量不要超过70-80μl。若需要更高底物，可提高腔肠素溶液的浓度。】

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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