DNase I Solution (RNase & Protease-free)

脱氧核糖核酸酶I溶液（无RNase&蛋白酶）

关键词：

Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase，5′-寡核苷酸-水解酶，Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas，EC No: 3.1.21.1，CAS NO：9003-98-9

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产品描述

脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶，偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下，DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在条件下，DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。

脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

本品是即用型溶液形式的DNase I，不含RNase和蛋白酶，适用于各种RNA处理。另外还提供实验所需的反应缓冲液和终止液，节省时间且用起来更方便。

产品应用

◇   制备不含DNA的RNA样本；

◇   RT-PCR反应前RNA样本内基因组DNA等可能存在DNA污染的去除；

◇   T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的体外RNA转录后DNA模板的去除；

◇   DNase I足迹法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白质相互作用；

◇   缺口平移法标记探针用；

◇   制备随机DNA片段文库；

◇   TUNEL细胞凋亡检测中用于剪切DNA制备阳性对照；

产品包装

保存与运输方法

保存：-20℃冻存，1年稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   本DNase I的储存缓冲液为50mM Tris-acetate(pH 7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v) glycerol。如需对其进行稀释，则使用本储存缓冲液进行稀释。

2）   酶的使用过程中需放在冰盒或冰浴内，使用结束立即放回-20℃保存。

3）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、RT-PCR反应前RNA样本内DNA污染的去除

1.1    DNA模板经核酸内切酶线性化，用酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量无菌去离子水中。

1.2    往一个RNase-free EP管内依次加入下列试剂：

【注意】：如果需要处理较大量的RNA样品，可按比例放大上述反应体系。条件许可下最好往体系内加入适量RNase抑制剂（货号：MF0218-2KU）以防止RNA降解。

1.3    37℃孵育30min。

1.4    往上述体系内加入1μl 10× Stop Solution使其终浓度为1×，混匀。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】：一定要先加入10× Stop Solution，然后再加热失活RNase I，否则先加热可能引起RNA被降解。

1.5    加热处理后的RNA样品即可直接用作RT-PCR反应用的模板。

二、体外RNA反转录后模板DNA的去除

2.1 每个含有0.5μg模板DNA的反转录体系中加入1U DNase I，某些情况下模板DNA完全消化所需的DNase I需通过实验来摸索。

2.2 37℃孵育15min。

2.3 酚/氯仿抽提失活DNase I。

三、其他用途请参考上述方法或参考文献等进行。

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