Turbo Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

Turbo；K12；Stbl2；HB101；Stable； Terrific Broth ( TBmedium)；TB培养基；LB培养基；

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产品组分：

菌株描述

Turbo菌株来源于K12菌株，是生长最快的大肠杆菌菌株。转化后6.5h可在平板上见到克隆，过夜生长的单克隆加入肉汤培养4h后可纯化DNA。非特异性核酸内切酶1（endA1）的活性缺失提高了质粒DNA的质量和产量。lacIq的严格控制表达使得毒性基因得以克隆。fhuA2突变使菌株具噬菌体T1抗性。∆lacZM15使菌株可进行蓝白斑筛选。

Turbo菌株基因型：F' proA+B+ lacIq ∆lacZM15 / fhuA2 ∆(lac-proAB) glnV galK16 galE15 R(zgb-210::Tn10)TetS endA1 thi-1 ∆(hsdS-mcrB)5  

产品描述

本品是Turbo菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上融化感受态细胞。

3） 转化高浓度质粒或高效连接产物需相应减少最终涂板的菌量。

4） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

6） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

2） 42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加入700 μl无菌的S.O.C或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 5000rpm离心1min，留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的S.O.C或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养6.5h以上。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

附表1固体和液体LB培养基配方

附表2固体和液体2-YT培养基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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