HB101 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

Stbl3；Stbl2；HB101；Stable；Direct repeats 正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；

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产品组分：

菌株描述

HB101菌株是大肠杆菌K12×B的杂交菌株，也是Stbl3的原始菌株。菌株含recA13突变，能有效抑制长末端重复片段的重组，降低了错误重组的频率。含hsdS20(rB-mB-)限制缺陷基因型，能阻止内源性限制酶对克隆DNA的切割，增强了外源DNA的稳定性。但不含endA1突变，其编码的核酸内切酶I可能降解克隆DNA，因此质粒提取过程中尽量使用高纯质粒提取试剂盒或经蛋白液处理以去除酶污染的干扰。此菌株携带链霉素抗性。菌株不含lacZ∆M15，无法提供来自pUC或类似载体上β-半乳糖苷酶基因的α-互补序列，因此不能进行蓝白斑筛选。HB101菌株适用于克隆、亚克隆和放大应用。适用于不需要蓝白斑筛选的载体。

HB101菌株基因型：F-mcrB mrr hsdS20(rB-mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1 rpsL20((strR) glnV44 λ-

产品描述

本品是HB101菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞>5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   转化高浓度质粒或高效连接产物需相应减少最终涂板的菌量。

4）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

5）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

6）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

7）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。

2）   向融化的感受态细胞中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25-30min。

3）   42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4）  向每个离心管中加入900 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5）  5000rpm离心1min，吸走900 μl上清，留取100μl左右吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

附表1 固体和液体LB培养基配方

附表2 固体和液体2-YT培养基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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