产品简介:
XL10-Gold Chemically Competent Cell
大肠杆菌化学感受态细胞
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货号
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产品名称
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规格
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价格(元)
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MF2315-1000UL
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XL10-Gold Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞
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10×100μl
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280
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MF2315-5000UL
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XL10-Gold Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞
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50×100μl
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1280
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产品组分:
组分编号
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组分名称
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货号(规格)
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MF2315-1000UL
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MF2315-5000UL
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MF2315-A
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XL10-Gold Competent Cell
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10×100μl
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50×100μl
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MF2315-B
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Control Vector puC19, 10 pg/µl
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10μl
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10μl
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菌株描述
XL10-Gold是目前转化效率最高的感受态细胞,由Stratagene公司开发用于大质粒的转化且保持高转化效率。XL10-Gold菌株具Hte(Hightransformation efficiency)表现型,明显提高连接和大质粒分子的转化效率。XL10-Gold能够降低大小偏好,产生更大、更复杂的质粒文库,能非常理想的用于构建质粒DNA文库。XL10-Gold缺失所有已知的限制性酶系统[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]。同时缺失核酸内切酶(endA)和重组酶(recA),前者大大提高纯化DNA的产量和质量,后者有助于确保插入DNA的稳定。F′附加体上lacIqZΔM15基因的存在使其可进行蓝白斑筛选。XL10-Gold菌株具四环素和氯霉素抗性。
XL10-Gold菌株基因型:Tetr Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F ́ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr]
产品描述
本品是XL10-Gold菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>2×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件:
保存:-80℃保存,六个月有效。
运输:干冰运输。
注意事项
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感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。
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最好在冰上融化感受态细胞。
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进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
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转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。
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XL10-Gold菌株本身能耐受<40μg/ml氯霉素,但对100μg/ml氯霉素很敏感。
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为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
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产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
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采用常规操作流程转化XL10-Gold感受态细胞,转化效率可达2×109 cfu/μg DNA。若是对转化效率要求更高,可尝试使用Stratagene的标准操作流程。
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为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
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从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。向融化的感受态细胞中加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹混匀(避免用移液枪上下吹打),冰浴静置25min。
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42℃热激35s【注意:热激<30s或>40s都会导致转化效率急剧降低】,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
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向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
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5000rpm离心1min,吸走900 μl上清,留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体,加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃过夜培养。
【注意】:a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可将所有转化产物涂布平板。b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
标准操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
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冰上提前预冷14ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管, 42℃预热NZY+肉汤培养基。
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从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。用手轻弹混匀吸取100 μl细胞到预冷的14ml离心管内。
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加4μl β-ME到细胞内。【β-ME能提高转化效率】
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轻弹管子。置于冰上孵育10min,每2min轻弹混匀细胞一次。
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往细胞内加入0.1-50ng目的DNA(或2μl连接产物),轻弹混匀细胞,冰上静置孵育30min。
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42℃水浴热激30s,热激过程的持续性非常重要。冰上静置2min,此过程不要摇动离心管。
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向每个离心管中加入900 μl预热的无菌NZY+肉汤培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,225-250 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
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吸取≤200 µl转化菌液,加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上(若需要颜色反应,平板含IPTG+ X-gal),用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃过夜培养。【注意:若是进行蓝白斑筛选,37℃至少培养17h,使得颜色能生成。之后再将平板置于4℃孵育2h,能加强颜色反应。】
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货号
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名称
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规格
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MF2320-1000UL
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JM110 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞
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10×100μl
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MF2315-1000UL
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XL10-Gold Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞
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10×100μl
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MF2324-1000UL
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XL1-Blue Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞
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10×100μl
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MF2325-1000UL
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XL2-Blue Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞
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10×100μl
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MF2326-1000UL
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SURE Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞
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10×100μl
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MF2327-1000UL
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TG1 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
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10×100μl
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MF2329-1000UL
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Turbo Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞
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10×100μl
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附表1固体和液体LB培养基配方
组分Component
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LB(液体)/升
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LB(固体)/升
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胰蛋白胨Tryptone
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10g
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10g
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酵母提取物Yeast extract
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5g
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5g
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氯化钠NaCl
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10g
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10g
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1N NaOH
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调整pH至7.0
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调整pH至7.0
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琼脂Agar
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/
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15g
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附表2固体和液体2-YT培养基配方
组分Component
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2YT(液体)/升
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2YT(固体)/升
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胰蛋白胨Tryptone
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16g
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16g
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酵母提取物Yeast extract
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10g
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10g
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NaCl
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5g
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5g
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1N NaOH
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调整pH至7.0
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调整pH至7.0
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琼脂Agar
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15g
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
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