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XL10-Gold Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
目录号 MF2315-5000UL 售价 1280.00元
规格 50×100μl 运输温度 干冰运输
其他名称 保存温度 -80ºC保存
CAS号 / 有效期 1年
应用 大肠杆菌克隆转化 订购数量
产品简介:

XL10-Gold Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

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产品订购:更大包装或产品技术问题,请来电/在线咨询,电话:021-54736159 。网站:www.maokangbio.com

货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2315-1000UL

XL10-Gold Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

280

MF2315-5000UL

XL10-Gold Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

50×100μl

1280


产品组分:

组分编号

组分名称

货号(规格)

MF2315-1000UL

MF2315-5000UL

MF2315-A

XL10-Gold Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2315-B

Control Vector puC19, 10 pg/µl

10μl

10μl


菌株描述

XL10-Gold是目前转化效率最高的感受态细胞,由Stratagene公司开发用于大质粒的转化且保持高转化效率。XL10-Gold菌株具Hte(Hightransformation efficiency)表现型,明显提高连接和大质粒分子的转化效率。XL10-Gold能够降低大小偏好,产生更大、更复杂的质粒文库,能非常理想的用于构建质粒DNA文库。XL10-Gold缺失所有已知的限制性酶系统[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]。同时缺失核酸内切酶(endA)和重组酶(recA),前者大大提高纯化DNA的产量和质量,后者有助于确保插入DNA的稳定。F′附加体上lacIqZΔM15基因的存在使其可进行蓝白斑筛选。XL10-Gold菌株具四环素和氯霉素抗性。

XL10-Gold菌株基因型:Tetr Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F ́ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr]


产品描述

本品是XL10-Gold菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>2×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

  1. 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

  2. 最好在冰上融化感受态细胞。

  3. 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

  4. 转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。

  5. XL10-Gold菌株本身能耐受<40μg/ml氯霉素,但对100μg/ml氯霉素很敏感。

  6. 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

  7. 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

  8. 采用常规操作流程转化XL10-Gold感受态细胞,转化效率可达2×109 cfu/μg DNA。若是对转化效率要求更高,可尝试使用Stratagene的标准操作流程。

  9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。向融化的感受态细胞中加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹混匀(避免用移液枪上下吹打),冰浴静置25min。

  2. 42℃热激35s【注意:热激<30s或>40s都会导致转化效率急剧降低】,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

  3. 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

  4. 5000rpm离心1min,吸走900 μl上清,留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体,加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃过夜培养。

    【注意】:a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可将所有转化产物涂布平板。b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

标准操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

  1. 冰上提前预冷14ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管, 42℃预热NZY+肉汤培养基。

  2. 从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。用手轻弹混匀吸取100 μl细胞到预冷的14ml离心管内。

  3. 加4μl β-ME到细胞内。【β-ME能提高转化效率】

  4. 轻弹管子。置于冰上孵育10min,每2min轻弹混匀细胞一次。

  5. 往细胞内加入0.1-50ng目的DNA(或2μl连接产物),轻弹混匀细胞,冰上静置孵育30min。

  6. 42℃水浴热激30s,热激过程的持续性非常重要。冰上静置2min,此过程不要摇动离心管。

  1. 向每个离心管中加入900 μl预热的无菌NZY+肉汤培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,225-250 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

  2. 吸取≤200 µl转化菌液,加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上(若需要颜色反应,平板含IPTG+ X-gal),用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃过夜培养。【注意:若是进行蓝白斑筛选,37℃至少培养17h,使得颜色能生成。之后再将平板置于4℃孵育2h,能加强颜色反应。】

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货号

名称

规格

MF2320-1000UL

JM110 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2315-1000UL

XL10-Gold Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2324-1000UL

XL1-Blue Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2325-1000UL

XL2-Blue Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2326-1000UL

SURE Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2327-1000UL

TG1 Chemically Competent Cell  大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

MF2329-1000UL

Turbo Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

 

附表1固体和液体LB培养基配方

组分Component

LB(液体)/升

LB(固体)/升

胰蛋白胨Tryptone

10g

10g

酵母提取物Yeast extract

5g

5g

氯化钠NaCl

10g

10g

1N NaOH

调整pH至7.0

调整pH至7.0

琼脂Agar

/

15g

附表2固体和液体2-YT培养基配方

组分Component

2YT(液体)/升

2YT(固体)/升

胰蛋白胨Tryptone

16g

16g

酵母提取物Yeast extract

10g

10g

NaCl

5g

5g

1N NaOH

调整pH至7.0

调整pH至7.0

琼脂Agar

/

15g

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

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