| 目录号 | MF2310-0500UL | 售价 | 600.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 10×50μl | 运输温度 | 干冰运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | AGL1 Electroporation Competent cell | 保存温度 | -80℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | / | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | 植物转基因研究 | 订购数量 |
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产品简介: AGL1Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞
产品标签： AGL1菌株；农杆菌感受态细胞；Rifampicin（Rif） 利福平；Kanamycin（kan）卡那霉素； EHA101；LBA4404；GV3101；植物转基因研究；
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产品描述： AGL1菌株的染色体背景为C58，RecA，核基因含利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。AGL1菌株适用于拟南芥、水稻、杨树等植物的转基因操作。
我司懋康生物提供的AGL1电转感受态细胞经特殊工艺制作，特别适合大质粒的转化。基因型C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105cfu/μg DNA。
产品组分：
保存与运输条件： 保存：-80℃保存，6个月有效。 运输：干冰运输。
注意事项 1） 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。 2） 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。 3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。 4） 为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。 5） 转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。 6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。 7） 利福平浓度应≤25μg/ml，过高浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。我司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含50μg/ml卡那霉素，若所用平板含20μg/ml 利福平，则转化效率降低到1/2。 8） 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但这些筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些筛选抗生素，因Ti质粒丢失的概率极低（基本可以忽略）。 9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法 1) 将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。 2) 取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。 3) 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg（体积不大于6μl）质粒DNA，用手拨打管底使其混匀，立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用【注意：由于感受态转化效率较高，第一次使用最好做预试验确定最佳的质粒用量】。 4) 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。 5) 加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，于28℃振荡培养2~3h。 6) 6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。【注意：当平板只含转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48h即可；当平板中加入双元载体抗生素的同时，再加入20μg/ml 利福平时，需28℃培养60h；若使用的平板含50μg/ml 利福平，需在28℃培养72-90h。】
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附表1 固体和液体LB培养基配方
附表2 固体和液体YEB培养基配方
附表3 常见农杆菌对抗生素敏感性总表
— — Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。 |
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