| 目录号 | MF0781-0.5ML | 售价 | 1820.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 | 5×100 µL kit | 运输温度 | 冰袋 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名称 | 双链DNA定量检测试剂盒 | 保存温度 | 2-6℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 | dsDNA定量 | 订购数量 |
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产品简介:
PicoGreen dsDNA Assay Kit 双链DNA（dsDNA）定量检测试剂盒
【产品升级声明】： 我司（懋康生物）从22.7.15日开始对本试剂盒内标品（B组分）进行更新，由原来的小牛胸腺DNA升级为Lamda DNA，内部测试后者与Picogreen具更佳的结合性和荧光信号。后续统一按照新标品供货。 如果希望继续提供原标品的老用户，务必下单时备注清楚。 特此声明。
产品关键词 Picogreen dsDNA Reagent；双链DNA检测试剂；RiboGreen；RNA定量试剂；ssDNA定量试剂；药物残留DNA检测；
产品信息
产品描述 Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建，DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义，疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。 Picogreen dsDNA定量检测：Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。
相比传统的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：①灵敏度高：数量级较UV吸光读数更敏感，可节省宝贵的样品；②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。
本试剂盒含有实验所需的所有试剂，使用更快捷方便。若按照2ml反应体系来计算（比色皿），10×100 µL kit可做100次反应；若按照200µl反应体系来计算（96孔板），10×100 µL kit可做1000次反应；单次反应体系取决于荧光检测仪器。
产品组分
保存与运输方法 保存：2-8℃避光保存，1年有效。 运输：冰袋运输。
注意事项 1） Picogreen含DMSO（已知有毒试剂），操作时请注意防护。 2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法 一、PicoGreen (2×)工作液配制 使用前将PicoGreen dsDNA reagent回温至室温；PicoGreen是以100µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO 中。实验当天，根据实验需求用1×TE按1:100的比例稀释适量母液到PicoGreen (2×)。 例如：要准备足够的操作溶液以2ml检测体系测定20个样品，可向19.8mL1×TE中加入200μL PicoGreen dsDNA reagent (200×)。 【注意】：a）由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。b）PicoGreen见光易降解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。c）溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。d）Picogreen的最终工作浓度建议为1×；用户也可根据实际情况调整此浓度，比如：最终工作浓度调低到0.5×。 二、检测步骤 2.1Lambda DNA standard (200ng/ml)的配制 用1×TE对Lambda DNA standard (10µg/ml)进行50倍稀释。比如，向10µl Lambda DNA standard (10µg/ml)加入490µl1×TE混匀，此时标准品浓度为200ng/ml； 2.2标准曲线的制备
【注意】：根据2010年《中国药典》所提，PicoGreen定量DNA的方法检出限~0.3ng/ml。DNA含量在1.25-80ng/ml范围内线性较好（R2＞0.99），因此，在此范围内设置浓度梯度，建议标准曲线较好。
①比色皿体系检测（2ml） a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和Lambda DNA standard（200ng/ml），通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液，随后加入1ml PicoGreen (2×)定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1×TE缓冲液为blank。【注意】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。
b、于荧光仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=~480nm/520nm。 【注意】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接 近荧光仪的最大值；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。
c、各浓度标准溶液得到的荧光值减去空白对照荧光值，之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。 d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线，来确定样本DNA的浓度。 ② 微孔板体系检测（200µl） a、 按照表2向96孔板中加入TE和Lambda DNA standard（200ng/ml），通过梯度稀释获得相应浓度的标准溶液，随后加入100µl PicoGreen (2×)定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1×TE缓冲液为blank。【注意】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微孔板的外部，可以驱散气泡。
b、于荧光酶标仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=~480nm/520nm。
【注意】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值接 近荧光仪的最大值；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。
c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值，之后对DNA浓度和荧光值做标准曲线。 d、测量待检样本的荧光值。根据荧光值和所建立的标准曲线，来确定样本DNA的浓度。
应用示例（荧光定量）：
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
引用文献：
[1]Wei Dong et al. Plasmid-loadable magnetic/ultrasound-responsive nanodroplets with a SPIO-NP dispersed perfluoropentane core and lipid shell for tumor-targeted intracellular plasmid delivery. Biomater. Sci., 2020,8, 5329-5345. https://doi.org/10.1039/D0BM00699H
were measured on a NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer (Thermo Scientific, USA) and by a PicoGreen dsDNA assay kit (MKBio, China).
[2] Feng X, Song Y, Sun Z, Loor JJ, Jiang Q, Gao C, Liu S, Yang Y, Du X, Wang Z, Liu G, Li X. Palmitic acid hinders extracellular traps of neutrophil from postpartum dairy cow in vitro. J Dairy Sci. 2022 Oct;105(10):8286-8297. doi: 10.3168/jds.2021-21405. Epub 2022 Aug 12. PMID: 35965126.
Detection of Extracellular dsDNA
Extracellular dsDNA levels in the supernatant were quantified using a PicoGreen dsDNA assay kit (catalog number MF0781; MKBio; Shanghai, China) according to manufacturer's instructions. Briefly, cells (1 × 106/mL) were seeded into 24-well plates in phenol-red-free RPMI-1640. After treatment, 100 μL of supernatant and 100 μL of PicoGreen working solution were mixed in the 96-well plate protected from light for 5 min at room temperature. Fluorescence intensity was measured at an excitation wavelength of 480 nm and an emission wavelength of 520 nm with an infinite M200 pro fluorescence microplate reader (Infinite 200 pro; Tecan).
[3] XinBian et al. Microbial and genes diversity analysis: Relationship between starch conversion and carbohydrate metabolism during Niandoubao fermentation via the glutinous proso millet (GPM) process. Food Control Volume 140, October 2022, 109154.
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