问:胶原酶NB(Collagenase NB)和中性蛋白酶NB(Neutral Protease NB)的来源是什么?
答:SERVA公司所有胶原酶NB和中性蛋白酶NB产品都来源自溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),其是一种厌氧、革兰氏阳性菌,天然代谢产生胶原酶和中性蛋白酶。
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问:为什么胶原酶NB1和中性蛋白酶NB根据活力值来包装,而所有其他胶原酶NB产品按照质量来包装?
答:胶原酶NB1和中性蛋白酶NB特别适合用来分离人胰腺来源的郎格罕氏岛(胰岛),这些酶的包装大小特别设计用于消化一个人胰腺。而其他胶原酶NB产品适合各种应用所以很难确定特定包装大小。
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问:如何保存胶原酶NB和中性蛋白酶NB?
答:SERVA公司胶原酶NB和中性蛋白酶NB产品以冻干粉形式提供,应置于2-8℃干燥保存(除非COA上特别说明)。在此条件下,产品在COA上注明的有效日期前都是稳定的。避免重复的开/关瓶子。
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问:是否应该重溶胶原酶NB和分装储存液或每次按需称取冻干粉产品?
答:SERVA公司推荐制备储存液,通过将胶原酶NB溶解在适当体积的缓冲液,如HBSS,PBS,Tris或Ringer溶液中。重溶储存液需过滤除菌(如果产品本身非无菌),分装,冻存在-20℃。内部稳定性测试显示如此条件下能保存1年,避免重复冻融。
如果冻干粉产品的瓶子开关数次,会使得粉末酶接触空气湿气,可能引起酶活性降低。
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问:是否可以过滤胶原酶NB和中性蛋白酶NB溶液?
答:是的,这些溶液都能经0.22µm滤膜除菌。建议使用低蛋白结合特性的滤器(滤膜),比如醋酸纤维素膜,PVDF或PES。
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问:加酶到细胞之前如何保存胶原酶溶液?
答:胶原酶NB和中性蛋白酶NB溶液需要持续性保存在冰上直至使用,因保存在更高温度时酶活力降低很明显。总而言之,尽快使用酶溶液。
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问:胶原酶NB和中性蛋白酶的最佳工作温度和最佳pH?
答:胶原酶NB的最佳工作温度37℃,最佳pH=7.4;中性蛋白酶的最佳温度37℃,中性pH皆可;
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问:是否能提供关于细胞分离应用的操作步骤?
答:SERVA胶原酶NB应用范围非常广,且使用实验室非常多。SERVA提供应用注意事项和关于各种组织来源的细胞分离所用的胶原酶浓度和消化时间的步骤信息。见官网:Application details for tissue dissociation。
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问:哪种缓冲液应用于细胞分离?
答:不推荐使用特别的缓冲液,因已知几种缓冲液,包括HBSS,PBS和Tris都适用于胶原酶的细胞分离。胶原酶依赖Ca2+,因此推荐缓冲液含≥2mM Ca2+。EDTA会抑制胶原酶活性,因此缓冲液中必须完全不含钙离子螯合剂比如EDTA。
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问:如何终止酶的消化反应?
答:通过降低温度、添加人或胎牛血清,稀释或清洗掉消化液都能终止消化反应。没有特别推荐因几种方法都有效,还是取决于组织和细胞类型和具体应用。
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问:如何换算胶原酶单位?
答:SERVA states collagenase activity in PZ units according to Wünsch:1 PZ U/mg ~ 3.9 FALGPA U/mg,1 PZ U/mg ~ 1000 Mandl or CDU/mg,1 PZ U/mg ~ 10 HP U/mg
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