Lyticase from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶，来自藤黄节杆菌

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见我司（懋康生物）整理的Zymolyase®酵母细胞壁溶解酶（酵母裂解酶）产品专题。

产品标签

Lyticase 溶壁酶；Zymolyase® 酵母细胞壁溶解酶；Yeast lytic enzyme 酵母裂解酶；Glusulase；Protoplast 原生质体；Spheroplast 原生质球；

产品信息

产品描述

Lyticase，中文名细胞壁溶解酶，溶壁酶，能水解聚β(1→3)-葡萄糖（poly-β(1→3)-glucose）比如酵母细胞壁葡聚糖。酵母细胞很难破坏，因为细胞壁可能形成荚膜或耐性孢子。通过使用裂解酶比如溶壁酶（lyticase）、几丁质酶（chitinase）、细胞壁溶解酶（zymolyase）和葡聚糖酶（gluculase）诱导部分原生质球形成，然后接下来酵母细胞被裂解释放DNA。溶壁酶（lyticase）更适合用于消化酵母细胞壁和产生转化用真菌来源的原生质球。本品以冻干粉形式供应，比活力≥200 units/mg solid。

产品特性

1）CAS NO：37340-57-1

2）来源：藤黄节杆菌（Arthrobacter luteus）

3）外观：冻干粉

4）同义名：Lyticase;酵母细胞壁溶解酶；酵母细胞壁溶解酵素；溶壁酶；破壁酶；

5）作用谱：报道显示lyticase有效溶解以下菌株包括 Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, and Schwanniomycesspecies.

6）比活力：≥200 units/mg solid

7）单位定义：3ml反应混合液中以酵母细胞悬液为底物，于25 °C，pH 7.5条件下，每分钟使得ΔA800发生0.001变化所用的酶量即为一个酶活力单位（unit）。

8）溶解性：易溶于水

酶活力测定方法

1. 实验试剂制备

1.1  超纯水(≥18 MΩxcm resistivity at 25 °C)

1.2  磷酸缓冲液（67mM磷酸钾缓冲液，pH 7.5，25℃）：用超纯水配制9.1mg/ml磷酸二氢钾溶液，用1M KOH调整pH至7.5（25 °C）。

1.3  底物（0.4% w/v啤酒酵母（酿酒酵母）悬浮液）

a）使用研钵和研杵研磨适量酵母菌以得到超过800mg的酵母粉。研细的粉末粒径需在25-35网目尺寸。

b）用超纯水加入酵母粉制备4mg/ml酵母溶液。

c）室温条件300rpm搅拌酵母溶液~2h。【注意】：更高速度搅拌会引起酵母细胞的过早裂解；

d）2h后停止搅拌，使得更大沉淀静置下去。小心吸取上方2/3的悬浮液到一个新的烧杯内。去除更大沉淀能够在进行分光光度计读数时，降低信噪比。

e）进行实验前需要确定底物浓度。测定酵母混合液和超纯水的A800，吸光度比值在0.6-1.0之间。如有必要，通过改变酵母粉量或超纯水来调整吸光度比值。

f）室温条件300rpm混匀底物，能稳定保存高达8h。

1.4  酶溶液

使用前，用冰超纯水配置500 units/ml溶壁酶溶液。【注意】：对一些粗制酶（lyticase）可能需要超过15min使其溶解。短时间超声1-15s能够促进酶溶解，但不会影响酶活性。

2. 反应程序

3ml反应体系中，各组分最终浓度是34 mM磷酸钾，~0.12%（w/v）啤酒酵母，25-35 units溶壁酶

2.1  按下表吸取各组溶液到5ml离心管内，

2.2  颠倒混合上述各管溶液，并于25 °C平衡5min。然后加入酶溶液。

2.3  立即颠倒混匀上述各管溶液，记录下~10min后下降后的A800。非常重要的是要即刻混匀所有比色皿试剂，并依此测定各管A800。

2.4  以2min为检测时间段，记录下每个测试组的最大线性比率ΔA800/min。每个测试组的最大线性比率需要用空白组来校正。校正后的ΔA800/min应在0.025-0.035范围内，才能保证后续结果的可靠性。如果不在此范围内，可通过调整适当酶溶液并重复读数。

3.  测定结果

3.1 计算1：

3.2 计算2：

保存与运输方法

保存：-20℃干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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