Aminophenyl fluorescein (APF) 氨基苯基荧光素

产品信息

产品描述

氨基苯基荧光素（APF）和羟苯基荧光素（HPF）是由T. Nagano开发的两种活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示剂，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更优秀的特异性和稳定性。APF和HPF显示有限的非选择性反应，和相对较高的光诱导氧化抗性。APF和HPF具细胞膜渗透性，本身无荧光，直到与羟基自由基或过氧亚硝基阴离子反应，还能与次氯酸阴离子反应，产生强绿色荧光（Ex/Em，~490/515nm），可用荧光显微镜、高通量成像仪、荧光酶标板或流式细胞仪检测。

本品以粉末形式提供，可直接溶于DMF配制成5mM储存液，常用工作浓度范围1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

产品特性

1）同义名：3'-(p-aminophenyl) fluorescein氨基苯基荧光素

2）分子式：C26H17NO5

3）分子量：423.42

4）纯度：≥95%

5）Ex/Em：490/515nm

6）溶解性：溶于DMSO（10mM）、DMF（5mM）

7）化学结构：

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

一、储存液制备

将低温保存的1mg粉末置于室温回温至少20min，之后加入472μl 无水DMF配置成5mM储存液。充分溶解和混匀后，按照单次用量分装，-20ºC避光干燥保存，避免反复冻融。

【注】：APF能溶于DMSO（10mM），但有数据显示DMSO是羟基自由基的淬灭剂，会干扰检测和降低灵敏性。因此，建议用DMF作为溶剂。

二、溶液体系检测

正式实验前，取一管HPF储存液置于室温回温，使其充分融解。之后用合适的缓冲液（比如HHBS缓冲液，PBS缓冲液）稀释到所需的工作浓度。建议起始浓度为1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

三、细胞体系检测

以下实验步骤仅做参考，最佳的工作浓度、孵育时间和温度需根据实际情况进行调整。在加入APF工作液之前按需处理细胞。

1）   根据具体用量，将DMF储存液用HHBS缓冲液或其他生理缓冲液稀释成1-10μM工作液。

2）   根据实验设计处理细胞（比如，RASM细胞用50-100nM 血管紧张素II处理3-5h）。

3）   取步骤1）准备的1-10μM工作液加入细胞，37ºC孵育20-60min。

4）   吸掉染色工作液，用HHBS或其他生理缓冲液替换。

5）   用合适的荧光仪器（Ex/Em=492/515nm）来检测。

【注1】：BSA和酚红会影响荧光，需谨慎使用。

【注2】：HPF和APF能用于溶液体系或胞内ROS检测。

注意事项

1）APF和HPF仅用于科研研究，不可用于体外诊断研究。

2）APF和HPF产生的荧光相对于其他活性氧探针比如DCFH弱很多，这是探针本身的特性决定的（见附表1 活性氧探针（HPF, APF, DCFH）对各种活性氧物质的反应特异性）。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

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附表1 活性氧探针（HPF, APF, DCFH）对各种活性氧物质的反应特异性

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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文献引用：

【1】Wu Q et al. Cascade enzymes within self-assembled hybrid nanogel mimicked neutrophil lysosomes for singlet oxygen elevated cancer therapy. Nat Commun. 2019 Jan 16;10(1):240.

The aminophenyl fluorescein (APF) as the HClO detector were purchased from Shanghai Maokangbio. The further EDT related therapeutic species including the ROS, 1O2 and the intermediate HClO have been detected in tumour tissues of different groups by using the corresponding fluorescent probes, DCFH-DA, SOSG and aminophenyl fluorescein (APF, as HClO detector).

【2】Juan J et al. Dynamic tracking of bulk nanobubbles from microbubbles shrinkage to collapse. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. Volume 589, 20 February 2020, 124430

3′- p - (aminophenyl) fluorescein (APF) was purchased from Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. (shanghai, China).

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3′-(p-aminophenyl) fluorescein (APF) was purchased from maokang-bio (Shang hai).

【4】Li L, Shao C, Liu T, Chao Z, Chen H, Xiao F, He H, Wei Z, Zhu Y, Wang H, Zhang X, Wen Y, Yang B, He F, Tian L. An NIR-II-Emissive Photosensitizer for Hypoxia-Tolerant Photodynamic Theranostics. Adv Mater. 2020 Nov;32(45):e2003471. doi: 10.1002/adma.202003471. Epub 2020 Oct 7. PMID: 33029855.

2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate (DCFH-DA), aminophenyl fluorescein (APF), and singlet oxygen sensor green (SOSG) were obtained from Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. (Shanghai, China).

【5】Liu J, Yuan Y, Cheng Y, Fu D, Chen Z, Wang Y, Zhang L, Yao C, Shi L, Li M, Zhou C, Zou M, Wang G, Wang L, Wang Z. Copper-Based Metal-Organic Framework Overcomes Cancer Chemoresistance through Systemically Disrupting Dynamically Balanced Cellular Redox Homeostasis. J Am Chem Soc. 2022 Mar 23;144(11):4799-4809. doi: 10.1021/jacs.1c11856. Epub 2022 Feb 22. PMID: 35192770. 

(APF, •OH) (Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd.)

HCT116/L-OHP or HCT116 cells

【6】Nuo Yu, Wenzhi Tu, Pu Qiu, Qian Ren, Xuming Chen, Meifang Zhu, Yong Liu, Zhigang Chen, Full-route advances via biomimetic and biodegradable ultrasmall-in-nano architectures with radiation-photo synergy,

Nano Today,Volume 43,2022,101427,ISSN 1748-0132, https://doi.org/10.1016/j.nantod.2022.101427.

APF),

1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) were purchased from Shanghai Maokang Biotechnology Co., LTD