RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液（强）

产品标签：

RIPA Lysis Buffer RIPA裂解液；细胞/组织裂解液；总蛋白提取；BCA蛋白浓度检测试剂盒；Bradford蛋白浓度测定试剂盒；PMSF；

产品信息

【温馨提示】：见我司懋康生物（MKBIO）整理的组织/细胞裂解液重要特点以及选择指南。

产品描述

RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），本意为Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对组织和细胞都有较好的裂解作用。RIPA的配方有很多种，根据其裂解强度的不同，大致可分为强、中、弱三类，应用上会有一些差异【见附表1】。

本品为裂解性较强的1×RIPA裂解液，主要成分为50mM Tris-HCl（pH 7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100,1%脱氧胆酸钠，0.1% SDS，以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂，可广谱且有效抑制蛋白降解，经本品裂解所得的蛋白样品，适用于蛋白免疫印迹（Western Blot），免疫沉淀（IP）等实验。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：MP1902-500T）测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度。

产品组成

保存与运输方法

保存：-20℃冻存，1年稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）  为了取得最佳的使用效果，建议第一次使用本品的时候将裂解液分装冻存，避免反复冻融。

2）  裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。

3）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

A，培养的细胞样品

1）  充分融解RIPA裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最终浓度为1mM。

2）  贴壁细胞：吸除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可忽略此步）。按照六孔板的每孔细胞加入150-250μl裂解液的比例加量。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

       悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3）  充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。

【裂解液用量说明】：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

B， 组织样品

1）  将组织剪切成细小的碎片，使用匀浆仪进行匀浆。

2）  充分融解RIPA裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最终浓度为1mM。

3）  按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以适当添加用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可适当降低用量。】

4）  充分裂解后，10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。

5）  如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分，之后使用相同步骤操作。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。

【注意】：RIPA裂解液的裂解产物经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散这些透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。像检测一些常见的转录因子，例如NF-kB、p53，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。  

附表1. 三种RIPA裂解液（强、中、弱）组分和应用差异