Liperfluo  细胞脂质过氧化物探针

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C11 BODIPY 581/591；Liperfluo ；lipid peroxidation 脂质过氧化；ferroptosis铁死亡；FeRhoNox-1 (Fe2+ indicator)亚铁离子荧光探针；MitoPerOx 线粒体脂质过氧化；CAS NO：1448846-35-2；

产品信息

【注j】：Liperfluo与C11 BODIPY 581/591都是普遍使用的脂质过氧化探针，两者的性能区别见附录一。

【注k】：Liperfluo配制成溶液（包括DMSO储存液）的稳定性非常差，建议在一天内用完。用户需提前做好实验计划，准备齐全材料，于检测当天配制溶液并完成所有检测。

产品描述

Liperfluo是专门开发用于特异性检测脂质过氧化物（LPO）的荧光探针，作为一种苝（perylene）衍生物，一旦被脂质过氧化物氧化，释放出强烈的荧光【见图1. Liperfluo的反应流程图】。其氧化态形式在水溶性环境中几乎无荧光，而在亲脂环境（比如：细胞膜）中发出强荧光，非常适合用于活细胞成像或流式分析。其氧化态形式的激发和发射波长分别为524nm和535nm，属于长波长，能有效降低光对样本造成的损伤和减少样本的自发荧光。基于LPO对Liperfluo上磷化氢基团的特异性氧化，使其在各种活性氧物质（包括：过氧化氢、羟基自由基、超氧化物、一氧化氮、过氧亚硝基、烷氧自由基、异丙苯过氧化氢）选择性检测LPO [1-2]。对脂质过氧化的监测与各种细胞过程密切相关，尤其是铁死亡，一种依赖铁的程序性细胞死亡，典型特征就是增高的脂质过氧化水平[1-4]。

图1. Liperfluo的反应流程图

产品特性

保存与运输方法

保存：+4°C避光干燥保存，2年有效。 

运输：冰袋运输。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）Liperfluo配制成溶液（包括DMSO储存液）的稳定性非常差，建议在一天内用完。用户需提前做好实验计划，准备齐全材料，于检测当天配制溶液并完成所有检测。

3）Liperfluo与C11 BODIPY 581/591都是普遍使用的脂质过氧化探针，两者的性能区别见附录一。

4）Liperfluo是活细胞探针，适用于活的悬浮或贴壁细胞染色，但不适用于固定细胞或固定组织的染色。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（活细胞成像分析）

1.染色工作液的准备

1.1储存液的制备：将低温保存的一管Liperfluo（50μg）从冰箱取出后置于室温至少20min，低速离心后，直接往管内加入60μl高质量无水、新鲜开封的DMSO，1min内用移液枪反复吹打30次。之后避光条件下涡旋震荡5min，使其充分溶解。配制好的DMSO储存液请避光保存，并在1天内用完。

1.2工作液的制备：Liperfluo最佳的染色浓度需根据实际的实验条件来调整。

2.细胞脂质过氧化物的检测步骤

2.1 在培养皿或孔板中接种细胞。

2.2吸走上清液，用无血清培养基清洗细胞1次。

2.3加入适量的Liperfluo工作液，37℃避光孵育30min。初次实验，请设置浓度梯度，以优化摸索最佳的工作浓度。

2.4吸走上清液，用无血清培养基清洗细胞2次；

2.5 在荧光显微镜下观察细胞或用流式细胞仪分析细胞，检测波长的设置如下：激发波长488nm，发射波长500-550nm。

应用示例（来自文献，仅做参考）

文献1）：Nishizawa, H., Matsumoto, M., Chen, G.et al. Lipid peroxidation and the subsequent cell death transmitting from ferroptotic cells to neighboring cells.Cell Death Dis 12, 332 (2021). https://doi.org/10.1038/s41419-021-03613-y

试验方法：为了测定脂质过氧化（Lipidperoxide），MEFs细胞铺在12孔板，经Erastin（0uM或10uM）处理24h，再孵育9-12h。加入LiperFluo到培养基中，37℃避光孵育1h。荧光显微镜成像分析。

Fig.A–G After WT MEFs had been exposed to erastin, the supernatant medium was exchanged (erastin was removed). At that time, Kusabira Orange (KuO) mice-derived MEFs were added. After 9 h from adding KuO MEFs, MEFs were analyzed by a fluorescent microscope. After 12 h from adding KuO MEFs, MEFs were analyzed by a flow cytometer. A Experimental outline. B Optical and fluorescent microscope image after Liperfluo staining. White arrowheads: KuO MEFs without lipid peroxidation. Pink arrowheads: WT MEFs with lipid peroxidation. Yellow arrowheads: KuO MEFs with lipid oxidation.

文献2）Kagan VE, Mao G, Qu F, Angeli JP, Doll S, Croix CS, Dar HH, Liu B, Tyurin VA, Ritov VB, Kapralov AA, Amoscato AA, Jiang J, Anthonymuthu T, Mohammadyani D, Yang Q, Proneth B, Klein-Seetharaman J, Watkins S, Bahar I, Greenberger J, Mallampalli RK, Stockwell BR, Tyurina YY, Conrad M, Bayır H. Oxidized arachidonic and adrenic PEs navigate cells to ferroptosis. Nat Chem Biol. 2017 Jan;13(1):81-90. doi: 10.1038/nchembio.2238. Epub 2016 Nov 14. PMID: 27842066; PMCID: PMC5506843.

试验方法：细胞接种在35mm的玻底培养皿，经表达mFAP或ER-FAP的病毒感染48h后，细胞用Liperfluo（10 μM）孵育30min，细胞用100Nm RSL3处理。倒置显微镜成像分析。

Fig.(a) Live cell fluorescence imaging of lipid hydroperoxides in WT and Acsl4 KO cells treated with RSL3 (100 nM, 6 hrs, scale bar 5 μm). (b) LiperFluo fluorescence intensity following RSL3 treatment in WT and Acsl4 KO cells. Insert: Fluorescence time course after RSL3 treatment (100 nM) in WT and Acsl4 KO cells with a time control. The data were from a minimum of 10 stage positions. For the statistical analysis, each stage position counted as one data entry. *P < 0.05 vs. WT+RSL3 cells (t-test). (c) WT and Acsl4 KO cells were treated with RSL3 (100 nM) for 2, 4, and 6 hrs before cell death analysis. Data are mean ± s.d., n=3. *P < 0.05 vs. ACSL4 KO+RSL3 (t-test). (d) Fluorescence responses from Mito-FAP (red, upper panel) and ER-FAP (red, lower panel) vs. LiperFluo (green, both panels, scale bars 5 μm).

参考文献

[1] Yamanaka, K., Saito, Y., Sakiyama, J., et al. A novel fluorescent probe with high sensitivity and selective detection of lipid hydroperoxides in cells. RSC Adv. 20, 7894-7900 (2012).

[2] Kagan, V.E., Mao, G., Qu, F., et al. Oxidized arachidonic and adrenic PEs navigate cells to ferroptosis. Nat. Chem. Biol. 13(1), 81-90 (2017).

[3] Angeli, J.P.F., Miyamoto, S., and Schulze, A. Ferroptosis: The greasy side of cell death. Chem. Res. Toxicol. 32, 362-369 (2019).

[4] Yang, W.S., and Stockwell, B.R. Ferroptosis: Death by lipid peroxidation. Trends Cell Biol. 26(3), 165-176 (2016).

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附录一Liperfluo与C11 BODIPY 581/591的性能比较

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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