产品简介:
GV3101(pSoup-p19) Electrocompetent Cell
农杆菌电转感受态细胞
产品订购：
|
货号
|
产品名称
|
规格
|
价格（元）
|
|
MF2470-0500UL
|
GV3101(pSoup-p19)
Electrocompetent Cell电转感受态细胞
|
10×50μl
|
650
|
|
MF2470-2500UL
|
GV3101(pSoup-p19)
Electrocompetent Cell电转感受态细胞
|
50×50μl
|
2600
|
【好消息】：见我司懋康生物整理的根癌（发根）农杆菌感受态细胞技术专题。
菌株描述
GV3101菌株的背景为C58型，核基因含利福平抗性基因rif。为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90（pTiC58DT-DNA），此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90（pTiC58DT-DNA）质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。pMP90（pTiC58DT-DNA）型Ti质粒携带筛选标签Gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗性。在GV3101菌株中转入help质粒：pSoup-p19，即得到GV3101(pSoup-p19)菌株，可协助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌内复制，同时赋予该菌株四环素（Tet）抗性。另外，来源于番茄丛矮病毒的p19蛋白，能抑制宿主对外源基因的RNA沉默效应，提高异源基因转录子的稳定性，进而改善异源蛋白的表达。本菌株适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。
我司（懋康生物）提供的GV3101(pSoup-p19) 电转感受态细胞经特殊工艺制作，特别适合大质粒的转化。
基因型为C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR)
Nopaline (pSoup-p19-tetR)，经pGs2质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>105cfu/μg DNA。
产品包装
|
组分编号
|
组分名称
|
货号（规格）
|
|
MF2470-0500UL
|
MF2470-2500UL
|
|
MF2470-A
|
GV3101(pSoup-p19) Electrocompetent
Cell
|
10×50μl
|
50×50μl
|
|
MF2470-B
|
pGs2 Control Vector (10ng/μl)
|
10μl
|
10μl
|
保存与运输方法
保存：-80℃保存，1年有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2） 整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
4） 为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
5） 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。
6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。
7）
利福平浓度应≤25μg/ml，过高浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
8） GV3101(pSoup-p19)感受态细胞虽具有四环素抗性，但在转入目标质粒涂板筛选阳性克隆时，只需加入目标质粒抗性的抗生素，不用加四环素。
9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。
2) 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min，待其融化，加入1~5μg（体积不大于6μl）质粒DNA，用手拨打管底使其混匀，立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用【注意：质粒DNA最好用试剂盒抽提，且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高，第一次使用最好做预试验确定最佳的质粒用量】。
3) 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200
ohm，V=2400 V（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作），将电击杯从冰中取出，吸水纸吸干外表面水分，快速放入电转槽中，启动电击，电击完成快速插入冰中。
4) 加入700μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，于28℃振荡培养2~3h。
5)
6,000rpm离心1min，留取
100ul左右上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。
相关产品
|
产品编号
|
产品名称
|
规格
|
|
MF2452-0500UL
|
MSU440
Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2454-0500UL
|
C58C1
Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2456-0500UL
|
K599
Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2458-0500UL
|
Ar
A4 Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2460-0500UL
|
Ar
Qual Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2462-0500UL
|
Ar
1193 Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2468-0500UL
|
GV3101(pSoup)
Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2470-0500UL
|
GV3101(pSoup-p19)
Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2472-0500UL
|
GV3101(pJIC
SA-rep) Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2474-0500UL
|
EHA105(pSoup)
Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
|
MF2462-0500UL
|
Ar
1193 Electrocompetent Cell农杆菌电转感受态细胞
|
10×50μl
|
附表1 固体和液体LB培养基配方
|
组分Component
|
LB（液体）/升
|
LB（固体）/升
|
|
胰蛋白胨Tryptone
|
10g
|
10g
|
|
酵母提取物Yeast extract
|
5g
|
5g
|
|
氯化钠NaCl
|
10g
|
10g
|
|
1N NaOH
|
调整pH至7.0
|
调整pH至7.0
|
|
琼脂Agar
|
/
|
15g
|
附表2 固体和液体YEB培养基配方
|
组分Component
|
YEB（液体）/升
|
YEB（固体）/升
|
|
胰蛋白胨Tryptone
|
5g
|
5g
|
|
酵母提取物Yeast extract
|
1g
|
1g
|
|
牛肉浸膏Beef Extract
|
5g
|
5g
|
|
蔗糖Sucrose
|
5g
|
5g
|
|
七水硫酸镁MgSO4·7H2O
|
0.49g
|
0.49g
|
|
1N NaOH
|
调整pH至7.0
|
调整pH至7.0
|
|
琼脂Agar
|
/
|
15g
|
— —Written/Edited by V.
Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
|
沪公网安备31011202021859号
